農(nóng)桿菌EHA105化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
產(chǎn)品及特點本產(chǎn)品為 EHA105 農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞，為 C58 型背景，核基因中含有 篩選標(biāo)簽利福平抗性基因 rif。為了便于轉(zhuǎn)化操作，此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運功 能的琥珀堿型 Ti 質(zhì)粒 pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)。此質(zhì)粒含有 vir 基因 (vir 基因是 T-DNA 插入植物基因組必需的元件，pEHA105 質(zhì)粒自身的 T-DNA 轉(zhuǎn)移功能被破壞，但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體 T-DNA 順利轉(zhuǎn)移)。本產(chǎn)品適用于 水稻、煙草等植物的轉(zhuǎn)基因操作，經(jīng) pCAMBIA2301 質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率高達(dá) 10E3cfu/μg。
規(guī)格及成分 成分 編號 十孔盒包裝
EHA105 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞 140383 10×100 μL
使用手冊 140383sc 1 份
運輸及保存 干冰運輸，-80℃保存，有效期一年。
自備試劑 質(zhì)粒 DNA、液氮等
使用方法 轉(zhuǎn)化前準(zhǔn)備
1. 冰水浴和 37℃水浴。
2. 液氮或干冰/乙醇混合物。
3. 將抗性平板在 28℃培養(yǎng)箱中平衡至少 15 分鐘。
轉(zhuǎn)化方法
1. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞于冰水浴中融化。
2. 無菌條件下，向剛剛?cè)诨母惺軕B(tài)細(xì)胞懸液中加入需要轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒，每 100μL 感受態(tài)細(xì)胞加 1ug 質(zhì)粒 DNA，輕柔混勻。冰水浴中靜置 10 分鐘。
3. 將離心管置于液氮中速凍 5 分鐘（注：也可以用干冰和無水乙醇混合物替代液氮）。
4. 迅速將離心管置于 37℃水浴靜置中 5 分鐘，不要晃動水面。然后快速轉(zhuǎn)至冰水浴中靜置 5 分鐘。
5. 加入 800 μL 無抗生素的 2×YT 或 LB 液體培養(yǎng)基，28-30℃振蕩培養(yǎng) 2~3小時。使菌體復(fù)蘇，表達(dá)抗性。
6. 5000rpm 離心 1 分鐘收菌，保留 100 μL 左右上清，輕輕吹打重懸菌體，均勻涂布到含有相應(yīng)抗生素的 LB 固體培養(yǎng)基平板上，待平板中的液體完全吸收后，倒置平板，28-30℃培養(yǎng) 48-72 小時。
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