柱式無內(nèi)毒素質(zhì)粒DNAout
產(chǎn)品及特點 本產(chǎn)品是整合基因柱式質(zhì)粒 DNAout 和菌體內(nèi)毒素清除劑兩產(chǎn)品而成。菌體內(nèi)毒素清除劑是天澤基因推出的產(chǎn)品，在質(zhì)粒提取前就把細(xì)胞壁上的內(nèi)毒素清除掉，徹底避免了目前通用的先提取 DNA+內(nèi)毒素混合物，再從中純化質(zhì)粒 DNA 的弊端。用本產(chǎn)品提取的質(zhì)粒 DNA，內(nèi)毒素的污染濃度低，適合于轉(zhuǎn)染等對內(nèi)毒素的污染敏感的實驗。
1. 操作簡單，只在經(jīng)典的柱式質(zhì)粒 DNA 提取前，增加菌體內(nèi)毒素清除一步。
2. 去內(nèi)毒素效果好，處理一次可以去除 99%以上的內(nèi)毒素。
3. 質(zhì)粒丟失少，產(chǎn)率只比柱式質(zhì)粒 DNAout 低 5-10%，效果好于先提質(zhì)粒DNA，再用液相內(nèi)毒素清除劑處理的方法。
4. DNA 可以直接用于轉(zhuǎn)染等實驗。
規(guī)格及成分 成 份 編 號 大紙盒包裝
菌體內(nèi)毒素清除劑 90901 200mL 柱式質(zhì)粒 DNAout 溶液 A 60205a 13 mL 柱式質(zhì)粒 DNAout 溶液 B 60205b 13 mL 柱式質(zhì)粒 DNAout 溶液 C 60205c 18 mL RNase A（10mg/mL） 3160 0.3mL 離心吸附柱 60911 50 套 通用洗柱液 60408 50 mL DNA 洗脫液 2.0 111205 10 mL 使用手冊 60205sc 1 份
運輸及保存 常溫運輸及保存，有效期一年。RNase A（10mg/mL）收到樣品后需要低
溫保存。
自備試劑 菌液
使用方法 一: 用菌體內(nèi)毒素清除劑清除 E.coli 細(xì)胞壁上的內(nèi)毒素。
1. 收集 1.5-5 mL E.coli 飽和菌液，12,000 rpm 離心 1 分鐘，棄上清，得到細(xì)菌沉淀。
2. 加入 1 mL 菌體內(nèi)毒素清除劑溫和混勻后 10,000-12,000 rpm 離心 1分鐘，棄上清（含內(nèi)毒素）。
3. 一次洗滌（1-2 步）可以去掉 90%以上的內(nèi)毒素，如果需要，可以再重復(fù)上述洗滌操作步驟 3 次，得到的菌體可以直接進(jìn)入后續(xù)的質(zhì)粒 DNA提取步驟。
二：從無內(nèi)毒素的 E.coli 中提取質(zhì)粒 DNA
4. 先將全部 RNase A 溶液全部加入到柱式質(zhì)粒 DNAout 溶液 A 中，搖勻后再取用，未用完的柱式質(zhì)粒 DNAout 溶液 A 好在 4℃保存。
5. 在第 3 步所得菌液中加入 250 uL 柱式質(zhì)粒 DNAout 溶液 A，用槍頭充分吹打使菌體重懸（此步在冰上操作效果更佳）。注意：細(xì)胞未充分懸浮會影響后續(xù)操作，可以使用漩渦振蕩器幫助混勻或使用 Tip 吸頭吹打沉淀至完全混勻。
6. 加入 250 uL 柱式質(zhì)粒 DNAout 溶液 B（如果溶液 B 有沉淀，用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用），溫和反復(fù)顛倒混勻 4-6 次，看到溶液變粘即可，然后冰上放置不超過 4-5 分鐘。注意：此步處理不能超過 5 分鐘，否則 DNA 的堿損傷比較嚴(yán)重。同時千萬不要劇烈振蕩，
否則基因組 DNA 斷裂產(chǎn)生的片段非常容易污染質(zhì)粒 DNA。溶液 B 用后需要將蓋擰緊存放，否則空氣中的二氧化碳會進(jìn)入溶液，形成碳酸，中和溶液 B 中的 NaOH，降低其效率）。
7. 加入 350 uL 冰上預(yù)冷的柱式質(zhì)粒 DNAout 溶液 C，反復(fù)顛倒混勻 4-6次，可見白色沉淀物產(chǎn)生，然后冰上放置至少 5 分鐘。
8. 高轉(zhuǎn)速（12,000 rpm 以上）4℃離心 5 分鐘，小心將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大，有時候出現(xiàn)沉淀漂浮是正?，F(xiàn)象，取上清時避開漂浮的沉淀即可。如果此步的離心在室溫進(jìn)行，更容易出現(xiàn)沉淀物漂浮的現(xiàn)象。
9. 靜置 2 分鐘以讓質(zhì)粒 DNA 與吸附柱充分結(jié)合，此步十分重要。
10. 室溫 12,000 rpm 離心 1 分鐘，棄收集管中的廢液。
11. 加入 500 uL 的通用洗柱液，室溫 12,000 rpm 離心 1 分鐘，棄收集管中廢液。注意：通用洗柱液中含乙醇，用后需要將蓋擰緊存放，否則乙醇會揮發(fā)。
12. 重復(fù)上步 1 次。
13. 室溫 12,000 rpm 離心 1 分鐘，甩干殘留液體。此步不能省略，否則殘留乙醇會影響 DNA 的后續(xù)使用（如 DNA 上樣時不能沉淀到加樣孔中）。
14. 將離心吸附柱置于一個新的 1.5 mL 塑料離心管（自備）中，加入 30-100uL 65-80℃預(yù)熱的 DNA 洗脫液 2.0，室溫放置 2 分鐘。常溫的 DNA洗脫液 2.0 也可以用于洗脫，但產(chǎn)量稍微有所降低。
15. 室溫 12,000 rpm 離心 1 分鐘，離心管底溶液即質(zhì)粒 DNA。1. 由于的吸附柱結(jié)合 DNA 能力較強，如果再加適量 DNA 洗脫液2.0 到離心吸附柱中，往往還能洗脫下很多質(zhì)粒 DNA（相當(dāng)于一次洗脫的 20-30%），但注意不要使用上步得到的 DNA 洗脫液 2.0 來洗脫。
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