柱式動(dòng)物DNAout

產(chǎn)品及特點(diǎn)

本產(chǎn)品在基因動(dòng)物 DNAOUT（CAT#:3670）基礎(chǔ)上改良而得的柱式升級(jí)產(chǎn)品，主要用于快速提取新鮮或冷凍的動(dòng)物組織中的基因組 DNA。跟動(dòng)物 DNAOUT相比，它具有下列特點(diǎn)：

1. DNA 更加純凈，大多數(shù) DNA 樣品的 OD260/280 值在 1.8-1.9 之間。

2. DNA 產(chǎn)率一般在 200ug/g 左右(跟組織種類密切相關(guān))。

3. 可直接用于 PCR、酶切、雜交等后續(xù)反應(yīng)。

4. 操作更加簡單，離心吸附操作代替離心沉淀，整個(gè)過程室溫操作約 10 分鐘，適合大規(guī)模樣品處理。

5. 安全無毒，本試劑盒對(duì)人體無毒，無腐蝕性和刺激性氣味。

6. 性價(jià)比高，質(zhì)量和國外同類產(chǎn)品相當(dāng)，但價(jià)格更便宜。
規(guī)格及成分 成份 編號(hào) 大紙盒包裝 
溶液 A LM71206A 40 mL 溶液 B LM71206B 20 mL 溶液 C LM71206C 50 mL 離心吸附柱 60911 50 套 通用洗柱液 60408 50 mL DNA 洗脫液 2.0 111205 10 mL 使用手冊(cè) 71206sc 1 份

運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸和保存、有效期一年。

自備試劑 氯仿（也可省略，但產(chǎn)量會(huì)降低）

使用方法 

注意：溶液 A 容易產(chǎn)生沉淀，溶液 B 十分粘稠，用前均需要在 65℃水浴中加熱使沉淀溶解或粘稠度降低，用前充分搖勻。

1. 根據(jù)使用材料的不同進(jìn)行下列操作：

a) 對(duì)貼壁細(xì)胞：吸盡培養(yǎng)液，在每 10 平方厘米細(xì)胞中加入 0.8 mL 預(yù)熱的溶液A，用槍充分吹打以確保細(xì)胞全部裂解，然后把裂解液轉(zhuǎn)移到 1.5 mL 塑料離心管中。

b) 對(duì)懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，吸盡液體，在每 1-5×106懸浮細(xì)胞中加入 0.8 mL預(yù)熱的溶液 A，用槍充分吹打以確保細(xì)胞全部裂解。然后把裂解液轉(zhuǎn)移到 1.5mL 塑料離心管中。如果是 fibroblasts 或 carcinoma 細(xì)胞，0.8 mL 溶液 A的細(xì)胞使用量不要超過 1×106 個(gè)細(xì)胞。

c) 對(duì)新鮮或冷凍的組織：先將剪切成小塊的新鮮組織或冷凍保存的組織放入 10mL 或 15 mL 塑料離心管中，每 50-100 mg 組織加 0.8 mL 預(yù)熱的溶液 A，用剪切式勻漿器勻漿 30 秒左右，然后把裂解液轉(zhuǎn)移到 1.5 mL 塑料離心管中。對(duì)肝、脾、胰、腎等細(xì)胞分裂十分旺盛的組織（細(xì)胞中含大量正在復(fù)制的 DNA），建議組織的使用量不要超過 50 mg。

d) 對(duì) DNALOCKER 保存組織：先用紙吸去 DNALOCKER 液體后再剪切成小塊，其余操作同新鮮或冷凍組織的處理。

2. 加入 0.4 mL 預(yù)熱的溶液 B 到裂解液中。由于溶液 B 十分粘稠，可將 1mL 槍頭剪掉一截再用，也可以用稱量方法加 0.4 g。加入溶液 B 后需要顛倒數(shù)次充分混勻。

3. 65℃水浴 5-10 分鐘。如果室溫放置，DNA 產(chǎn)量將降低 10-20%。

4. 加入 0.2 mL 自備氯仿，振蕩器上充分振蕩混均 30 秒，此時(shí)溶液將呈乳白色。一定要確保離心管底的液體被震蕩起來。

5. 12000-15000 g 室溫離心 2 分鐘。上清透明，中間層為白膜（蛋白層）。

6. 小心將上清液平均轉(zhuǎn)移到兩個(gè)新的離心管中，避免觸及中間的白膜。

7. 每個(gè)管中加入 1.5 倍體積的溶液 C，充分顛倒混勻。

8. 分兩次上柱（即先轉(zhuǎn)移一半的混合液到離心吸附柱中，室溫放置 2 分鐘，12000-15000 g 室溫離心半分鐘，棄穿透液，然后再將剩下的混合液到離心吸附柱中，室溫放置 2 分鐘，12000-15000 g 室溫離心半分鐘，棄穿透液）。

9. 加 0.7 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，12000-15000 g 室溫離心半分鐘，棄穿透液。

10. 加 0.3 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，12000-15000 g 室溫離心半分鐘，棄穿透液。

11. 12000-15000 g 室溫再離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的通用洗柱液會(huì)污染 DNA。

12. 室溫放置半分鐘使殘留乙醇揮發(fā)。

13. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到一新的 1.5 mL 塑料離心管中，加入 50-100 uL DNA 洗脫液 2.0，室溫放置離心吸附柱 1-2 分鐘。

14. 12000-15000 g 室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為 DNA 樣品，可以立即使用或存放于冰箱待用。