石蠟包埋組織RNAout

產品及特點
本石蠟包埋組織本是珍貴的分子生物學研究材料，但是由于它們的保存時間一般 都比較長，很不容易從中提取到可以進行 PCR 的 RNA，存在的主要問題是 RNA 的降解和脫蠟過程中樣品的丟失。本產品是專門用于從甲醛和非甲醛固定的石蠟包 埋組織中快提 RNA 的試劑，具有下列特點：

1. 一管式操作，避免了可能的交叉污染和樣品 RNA 的丟失。

2. 含一步離心式脫蠟試劑，不需要使用有毒的二甲苯，健康環(huán)保。

3. 能有效去除基因組 DNA 的污染，得到的 RNA 可直接用于 RT-PCR 反應。

4. 即開即用，客戶自己不需要準備額外的試劑。 
規(guī)格及成分 成 份 編 號 30 次包裝 
溶液 A LM81102A 30 mL 溶液 B LM81102B 3 mL 溶液 C LM81102C 5 mL 溶液 D LM81102D 15 mL 微量核酸沉淀劑 （CAT#:LM50903-30） LM50903 30 mL RNase-free 水 LM80403 10 mL 使用手冊 LM81102sc 1 份 

運輸及保存 低溫運輸，4℃保存（溶液 C 需要-20℃放置），有效期一年。

自備試劑 氯仿、75%乙醇。 

使用方法

1. 將 5 片厚度為 6-8 um 的石蠟包埋組織切片轉移到 1.5 mL 塑料離心管(好 使用螺旋蓋離心管)中并加入 1 mL 溶液 A，在振蕩器上以大速度振蕩 10 秒。

2. 加入 75 uL 溶液 B，在振蕩器上以大速度振蕩 10 秒。

3. 7000×g 室溫離心 2 分鐘，溶液將形成兩個相，其中組織切片位于下相。

4. 小心吸棄上層液體。

5. 將離心管放入真空抽干機中抽干下層的液體，一般需要一小時。

6. 加入 150 uL 溶液 C，55℃保溫過夜。

7. 短暫離心，95℃保溫 10 分鐘。

8. 加入 0.5 mL 溶液 D，充分震蕩半分鐘。

9. 加入 0.1 mL 自備氯仿，振蕩器上充分振蕩混均 30 秒。

10. 13000-5000×g 室溫離心 3-5 分鐘。

11. 將上清液（約 0.6 mL）轉移到另一干凈的 1.5 mL 塑料離心管中。下層有機 相（藍色）和中間層含有 DNA 和蛋白質，避免觸及，否則將產生蛋白質和 DNA 污染。為保險起見，可以留下 100 uL 上清液不取。同時吸取上清時好緩慢 進行，否則容易吸出交界面的不可見的 DNA。

12. 在上清液中加入兩倍體積的微量核酸沉淀劑，振蕩器上振蕩 30 秒混勻。

13. 13000-15000 g 室溫離心 5 分鐘，離心底的側面將形成 RNA 沉淀。如果需 要提高 RNA 回收率，可以將離心時間延長到 20 或 30 分鐘。

14. 小心吸棄上清液，注意不要吸棄 RNA 沉淀。

15. 在含 RNA 沉淀的離心管中加入 1mL 自備的 75%乙醇，振蕩混勻 30 秒。

16. 13000-15000 g 室溫離心 1 分鐘。

17. 小心吸棄上清液，注意不要吸棄 RNA 沉淀。

18. 短暫快速離心，用移液槍小心吸棄殘留乙醇(約 50 uL)。注意不要吸棄沉淀。 此步十分重要，否則殘留的乙醇會影響 RNA 的使用。

19. 室溫放 1-2 分鐘后立即加入 50-100 uL RNA 溶解液使 RNA 沉淀溶解。千萬 不要用真空離心法使 RNA 沉淀過于干燥，否則 RNA 將變得十分難溶。樣品立 即使用或存放于-80℃待用。

20. RNA 完整性的電泳檢測： 21. RNA 產量產率測定：將 5-10 μL RNA 溶于 TE 緩沖液中(pH7.5-8.2 之間)檢 測其在 OD260 的光吸收。通過光吸收可以得出 RNA 濃度（1 OD260 的 RNA=40 μg/mL），進而計算出 RNA 的產量（濃度×體積)和產率(RNA 產量/ 組織用量)。

22. RNA 純度測定：無污染的總 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之間(具 體數值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關)，高于此范圍則分別表示樣品 可能有蛋白質污染，但一般不影響 RT-PCR 等反應。