兩管式RT-PCR試劑盒（AMV-Taq）
產(chǎn)品及特點(diǎn)本產(chǎn)品使用重組禽類(lèi)成髓纖維病毒逆轉(zhuǎn)錄酶(Avian Myeloblastosis Virus Reverse Transcriptase, AMV RT)，從總 RNA 或者 Poly(A)+ RNA 合成鏈 cDNA 的試劑盒， 含有 cDNA 鏈合成所需的所有試劑。AMV RT 具有 RNA 聚合酶活性和 RNase H 的 活性，能夠作用于 GC 含量高，二級(jí)結(jié)構(gòu)復(fù)雜的 RNA。合成的鏈 cDNA 可廣泛應(yīng)用于 第二鏈合成、雜交、PCR 擴(kuò)增、Real-time PCR 反應(yīng)等。
1. 即開(kāi)即用，足夠 50 次 RT 反應(yīng)（20μL 體系）和 600 次 PCR 反應(yīng)（30μL 體系）。
2. cDNA 鏈合成試劑盒可靈活選用隨機(jī)引物、Oligo dT 引物或基因?qū)Ｒ灰铮m合 各種情況。
3. 兩管式操作，RT 和 PCR 在不同試管中進(jìn)行，便于單獨(dú)優(yōu)化 RT 反應(yīng)或 PCR 反應(yīng)條件。
4. 全長(zhǎng)的鏈 cDNA 產(chǎn)量高，最長(zhǎng)可合成 8 kb 的 cDNA。
兩管式RT-PCR試劑盒（AMV-Taq）
規(guī)格及成分 成 分 編 號(hào) 十孔盒包裝
AMV 逆轉(zhuǎn)錄酶 (含 RI) 130921a 50 μL
AMV RT Buffer（含 dNTP） 130921b 300 μL
Oligo (dT)18引物(0.5 μg/μL) 100814 50 μL
隨機(jī)引物(0.5 μg/μL) 100409 50 μL
PCR MagicMix 3.0，含染料 90805 9 mL
RNase-free 水 80403 5 mL
使用手冊(cè) 130921sc 1 份
兩管式RT-PCR試劑盒（AMV-Taq）運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,-20℃保存, 有效期一年。
自備試劑 樣品 RNA、模板專(zhuān)一正向和反向引物。
使用方法 一、樣品 RNA 的制備（本試劑盒不提供相關(guān)試劑）
1. 可用自本公司各種 RNA 提取方法提取樣品的 RNA，也可以選用其他供應(yīng)商的產(chǎn)品，但得到的 RNA 一定要溶解在 RNase-free 的超純水中。
二：RT（逆轉(zhuǎn)錄）反應(yīng)合成 cDNA
2. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系（20 μL 體系）:
RNA 模板
總 RNA < 5 µg
或 poly(A) mRNA
或隨機(jī)引物(0.5 μg/μL) 1 μL
或自備模板專(zhuān)一反向引物(20 pmol/μL) 1-2 μL
RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 μL
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。隨機(jī)引物與 RNA 模板的比例將決定cDNA 合成的平均長(zhǎng)度（成反比）。一般情況下隨機(jī)引物效率好于 OligodT 引物，但如果只想轉(zhuǎn)錄總 RNA 中的 mRNA（只占 5%左右），則可優(yōu)先選用 OligodT 引物，這樣就可以排除非 mRNA 的干擾。
3. 輕輕混勻后離心 3-5 sec，反應(yīng)混合物在 65℃溫浴 5 min 后冰浴 30 sec，離心 3-5 sec。
將試管冰浴，再加入如下組分：
AMV RT Buffer（含 dNTP） 6 μL
AMV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI） 1 μL
輕輕混勻后離心 3-5 sec。
在 PCR 儀上按下列條件進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)：
cDNA 合成 42℃ 30-60 min；
終止反應(yīng) 85℃ 5 min（酶失活），處理后，置于冰上放置。
注意：若使用 Oligo dT 引物或序列特異性引物，進(jìn)行 42℃，30-60 min 反應(yīng)； 若
使用隨機(jī)引物，應(yīng)先進(jìn)行 25℃，10min 反應(yīng)，然后進(jìn)行 42℃，30-60 min 反應(yīng)。
三、PCR（30 μL 體系）
4. 在 PCR 管中加入下列成分：
成分 加入量
PCR MagicMix 3.0，含染料 15 μL
cDNA 樣品（上步的 RT 反應(yīng)液） 1-5 μL
模板專(zhuān)一性正向引物(10 pmol/μL) 1-2 μL
模板專(zhuān)一性反向引物(10 pmol/μL) 1-2 μL
補(bǔ)水到 30 μL
注意：cDNA 也可以稀釋后作 PCR 模板。是否稀釋或稀釋倍數(shù)取決于靶基因的豐度。
5. PCR 反應(yīng)參數(shù)(需要根據(jù)模板和引物決定，下面的只做參考)：
過(guò)程 溫度 時(shí)間
預(yù)變性 94℃ 5 min
PCR 反應(yīng)
（35 個(gè)循環(huán)）
94℃ 1 min
55℃ 1 min
20191012ww
72℃ 2 min
最后延伸 72℃ 10 min
四、電泳檢測(cè)
取 5-10μL PCR 產(chǎn)物直接在 PAGE 或瓊脂糖凝膠上電泳，跟分子量標(biāo)準(zhǔn)比較估計(jì)出擴(kuò)增產(chǎn)物的大小。注：本試劑盒中的 PCR mix 含有甘油和染料，可以直接上樣，不需要額外再加電泳上樣液。
關(guān)鍵字： 兩管式RT-PCR試劑盒（AMV-Taq） 廠家；兩管式RT-PCR試劑盒（AMV-Taq） 現(xiàn)貨
上?？道噬锟萍加邢薰臼且患壹邪l(fā)、生產(chǎn)、銷(xiāo)售、服務(wù)于一體的一家生物科技企業(yè)，專(zhuān)營(yíng)生化試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、基因、蛋白、抗體、Elisa試劑盒、細(xì)胞生物學(xué)，分子生物學(xué)等高生物產(chǎn)品?？偛课挥谏虾?，并在北京、廣東，江西，吉林等全國(guó)30多個(gè)省市設(shè)有分公司和代理機(jī)構(gòu)。涉及的產(chǎn)品被中國(guó)科學(xué)院、清華、北大、復(fù)旦，上海交大，復(fù)旦醫(yī)學(xué)院，上海中醫(yī)藥大學(xué)，華東師范大學(xué)，第二軍醫(yī)大學(xué)，曙光醫(yī)院，浦東新區(qū)人民醫(yī)院等知名科研院所廣泛使用，可靠而穩(wěn)定的質(zhì)量和完善的售后服務(wù)確。