外泌體 DNA-RNAout
產品及特點本外泌體是指包含了復雜 RNA 和蛋白質的小膜泡 (40-100nm)。多種細胞在正常及 病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細胞內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體,經 多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中 。所有培養(yǎng)的細胞類型均可分泌外泌 體,且外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。 有關他們 分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應功能的精確分子機制剛剛開始研究。但從外泌 體提取核酸(主要是 RNA)非常棘手,為此本公司開發(fā)于外泌體核酸(DNA 和 RNA) 純化試劑。本產品具有下列特點:
1. 一管式操作,在同一試管中完成,減少樣品丟失。
2. 沉淀法,不使用離心柱,能有效避免小 RNA 的丟失。
3. 能同時提取 RNA(包括 RNA 和 miRNA)和 DNA。
4. 回收率達到 90%以上,高于絕大部分基于離心柱的提取方法。
外泌體 DNA-RNAout
規(guī)格及成分 成 份 編 號 小扁盒包裝
外泌體核酸提取溶液 A 180807a 30 mL 外泌體核酸提取溶液 B 180807b 35 mL 外泌體核酸提取溶液 C 180807c 50 mL RNase-free 水 80403 1 mL
使用手冊 180807sc 1 份
外泌體 DNA-RNAout運輸及保存 常溫運輸保存,但外泌體核酸提取溶液 A 長期保存需要放 4℃。有效期一年。自備試劑 外泌體。
使用方法一、備外泌體(本試劑盒不提供相關試劑) 注意:自備的外泌體需要立即使用或放-80℃長期保存。用于核酸提取的外泌體可以 是沉淀,也可以是重懸液。 二、外泌體核酸提取
1. 從冰箱取出外泌體核酸提取溶液 A 放室溫或握在手上融化,直到沒有任何晶體。
2. 標記 1.5-2 mL 螺旋蓋塑料離心管(如 Sarstedt CAT#:782.694.006),為避免污染, 建議不要使用壓蓋式塑料離心管。在每個管蓋上做個標記,以在下步離心時有 意將標記方向朝向心面或離心面。
3. 將不超過 200μL 的外泌體重懸液加入到標記好的塑料離心管中。
4. 每管中加入 600μL 外泌體核酸提取溶液 A,蓋上蓋子后振蕩數秒混勻。
5. 室溫放置 3 分鐘。
6. 加入 0.7 mL 外泌體核酸提取溶液 B,旋緊蓋后振蕩 30 秒混勻。
7. 14,000 g 室溫離心至少 15 分鐘。注意:離心時如果把標記固定朝向心面或離心面, 則在后面的操作均得按此朝向進行離心。
8. 小心移棄上清,注意不要觸及管底和管壁離心面的核酸沉淀(此時可能看不見)。
9. 加入 1.0 mL 外泌體核酸提取溶液 C, 振蕩數秒.
10. 14,000 g 室溫離心 5 分鐘。注意:離心管標記的朝向要跟上面的一致。
11. 小心移棄上清,注意不要觸及管底和管壁離心面的核酸沉淀(可能在離心管內壁的 離心面呈膜狀)。
12. 再短暫離心數秒, 用移液器移棄殘留液體(約 50 μL)。
13. 加入 200 μL RNase-free 水,用移液槍仔細吹打離心管管底和管壁離心面的膜狀沉 淀。如果溶液稍呈混濁狀屬于正常。注意:所得溶液即為外泌體核酸溶液。如果只 需要 RNA,必須去除 DNA,則另外用自備的 RNase-free DNase 對 DNA 污染進 行降解。反之如果只需要 DNA,必須去除 RNA,則另外用自備的 DNase-free RNase 對 RNA 污染進行降解。
14. 直接取適量用于后續(xù)實驗。樣品可以室溫放置 2 小時,也可保存于-80℃保存一個月。
5. 無毒環(huán)保,不需要使用苯酚和氯仿等有毒的有機溶液。
6. 本產品只能用于科研,不能。用于臨床
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上??道噬锟萍加邢薰臼且患壹邪l(fā)、生產、銷售、服務于一體的一家生物科技企業(yè),專營生化試劑、標準品、基因、蛋白、抗體、Elisa試劑盒、細胞生物學,分子生物學等高生物產品??偛课挥谏虾?,并在北京、廣東,江西,吉林等全國30多個省市設有分公司和代理機構。涉及的產品被中國科學院、清華、北大、復旦,上海交大,復旦醫(yī)學院,上海中醫(yī)藥大學,華東師范大學,第二軍醫(yī)大學,曙光醫(yī)院,浦東新區(qū)人民醫(yī)院等知名科研院所廣泛使用,可靠而穩(wěn)定的質量和完善的售后服務確。