生物活性產(chǎn)品描述 AZD6482是一種PI3Kβ抑制劑，IC50為10 nM，作用于PI3Kβ比作用于PI3Kδ， PI3Kα和PI3Kγ選擇性分別高8，87和109倍。Phase 1。 靶點(diǎn) PI3Kβ [1] PI3Kδ [1] DNA-PK [1] PI3Kα [1] PI3Kγ [1] IC50 10 nM 80 nM 420 nM 870 nM 1090 nM 體外研究 AZD6482是PI3Kβ抑制劑，IC50為21 nM, 然而, AZD6482也抑制PI3Kα,γ,和δ, IC50為 80 nM到1.4 μM, 明顯比其(+)-對(duì)印異構(gòu)體(S型)低很多。AZD6482是抗血小板藥，在洗滌血小板聚集(WPA)實(shí)驗(yàn)中，抑制活化血小板粘附/聚集，且促進(jìn)血小板解聚，IC50為6 nM。而且, AZD6482靶向作用于PI3Kβ，特定抑制血栓形成而不影響正常止血。因此, AZD6482作為抗血栓藥，用于預(yù)防血栓疾病。[1] 體內(nèi)研究 特征 AZD6482是PI3Kβ抑制劑，作為抗血小板和抗血栓的藥劑。 推薦的實(shí)驗(yàn)操作(此推薦來(lái)自于公開(kāi)的文獻(xiàn)所以Selleck并不保證其有效性) 激酶實(shí)驗(yàn): [1] 抑制PI3K酶實(shí)驗(yàn) 通過(guò)AlphaScreen酶活性測(cè)定使用人重組酶測(cè)定對(duì)PI3Kβ, PI3Kα, PI3Kγ和 PI3Kδ的抑制效果。該法測(cè)量PI3K調(diào)節(jié)的PIP2和PIP3之間的轉(zhuǎn)換。生物素化的PIP3，即GST-標(biāo)記的血小板-白細(xì)胞C 激酶底物同源(PH) 域和兩個(gè)AlphaScreen 磁珠形成復(fù)合體，在680 nm處形成激光信號(hào)。在酶反應(yīng)復(fù)合體中形成的PIP3與生物素化的 PIP3競(jìng)爭(zhēng)性地結(jié)合到PH 域，引起提高酶產(chǎn)物，降低信號(hào)。AZD6482 溶于DMSO，加到385孔板上。PBKβ, PBKα, PBKγ, 或PBKδ加到 Tris buffer(50 mM Tris pH 7.6, 0.05% CHAPS, 5 mM DTT, 和24 mM MgCl2) 中，和AZD6482 預(yù)溫育20分鐘，然后加入含 PIP2和ATP的底物溶液。20分鐘后，加入含EDTA 和生物素-PIP3的終止液，而終止酶反應(yīng),隨后加入含GST-grpl PH 和AlphaScreen磁珠的檢測(cè)液。實(shí)驗(yàn)板在暗中放置最少5小時(shí)，然后用于實(shí)驗(yàn)分析。實(shí)驗(yàn)中DMSO, ATP和 PIP2 的最終濃度分別為0.8%, 4 μM, 和40 μM。計(jì)算IC50值。 細(xì)胞試驗(yàn): [1] 細(xì)胞系 人血小板顆粒 濃度 0-60 nM, 溶于 DMSO 處理時(shí)間 5分鐘 方法 在洗滌血小板聚集 (WPA)實(shí)驗(yàn)中,從人血液中分離血小板顆粒，再懸浮在含1 μM水蛭素和0.02 U/mL三磷酸腺苷雙磷酸酶的2×1015/L Tyrodes buffer 中。然后，血小板懸浮液在室溫下擱置30分鐘。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，加入CaCl2，終濃度為2 mM。AZD6482, 溶于DMSO,加到96孔板中，然后 加入洗滌的血小板懸液。血小板懸液和 AZD6482預(yù)溫育5分鐘。在650 nm處記錄吸光值，然后震蕩板5分鐘再記錄吸光值，記為R0和Rl。每孔加入特定濃度的小鼠 抗人CD9抗體 ，震蕩板10分鐘，記錄吸光值，記為R2。用于數(shù)據(jù)分析, 除去所有數(shù)據(jù)中和TB結(jié)合而測(cè)定的吸光值，然后根據(jù)公式: [(R1-R2)/R1]×100 計(jì)算聚集百分?jǐn)?shù)。另外，根據(jù)同樣公式 [(R0-Rl)/R0]×100 評(píng)定抑制劑的自發(fā)聚集效果。然后測(cè)定IC50值。 不同實(shí)驗(yàn)動(dòng)物依據(jù)體表面積的等效劑量轉(zhuǎn)換表（數(shù)據(jù)來(lái)源于FDA指南） 小鼠 大鼠 兔 豚鼠 倉(cāng)鼠 狗 猴 狒狒 重量 (kg) 0.02 0.15 1.8 0.4 0.08 10 3 12 體表面積 (m2) 0.007 0.025 0.15 0.05 0.02 0.5 0.24 0.6 Km 系數(shù) 3 6 12 8 5 20 12 20 動(dòng)物A (mg/kg) = 動(dòng)物B (mg/kg) × 動(dòng)物B的Km系數(shù) 動(dòng)物A的Km系數(shù) 例如，依據(jù)體表面積折算法，將白藜蘆醇用于小鼠的劑量22.4 mg/kg 換算成大鼠的劑量，需要將22.4 mg/kg 乘以小鼠的Km系數(shù)（3），再除以大鼠的Km系數(shù)（6），得到白藜蘆醇用于大鼠的等效劑量為11.2 mg/kg。大鼠劑量 (mg/kg) = 小鼠劑量 (22.4 mg/kg) × 小鼠的Km系數(shù)(3) = 11.2 mg/kg 大鼠的Km系數(shù)(6) 1 參考文獻(xiàn) [1] Fjellstrom O, et al. US Patent, WO2009093972.Clinical Trial Information( data from http://clinicaltrials.gov) NCT Number Recruitment Conditions Sponsor/Collaborators Start Date Phases NCT00853450 Completed Antiplatelet Effect AstraZeneca February 2009 Phase 1 NCT00688714 Completed Antiplatelet Effect AstraZeneca January 2008 Phase 1 化學(xué)數(shù)據(jù)點(diǎn)擊下載AZD6482 (SDF格式文件) 分子量 408.45 化學(xué)式 C22H24N4O4 CAS號(hào) 1173900-33-8 穩(wěn)定性 3年 -20℃粉狀 6個(gè)月-80℃溶于溶劑 別名 KIN-193 溶解性 (25°C) * 體外 DMSO 82 mg/mL (200.75 mM) 乙醇 10 mg/mL (24.48 mM) 水 <1 mg/mL (<1 mM) 體內(nèi) 30% PEG400/0.5% Tween80/5% propylene glycol 30 mg/mL * <1 mg/ml 指產(chǎn)品微溶或不溶* 溶解度檢測(cè)是由Selleck技術(shù)部門檢測(cè)的，可能會(huì)和文獻(xiàn)中提供的溶解度有所差異，這是由于生產(chǎn)工藝和批次不同產(chǎn)生的正常現(xiàn)象。 .Chemical Name (R)-2-(1-(7-methyl-2-morpholino-4-oxo-4H-pyrido[1,2-a]pyrimidin-9-yl)ethylamino)benzoic acid 制備儲(chǔ)備液 1 mg 5 mg 10 mg 1 mM 2.4483 mL 12.2414 mL 24.4828 mL 5 mM 0.4897 mL 2.4483 mL 4.8966 mL 10 mM 0.2448 mL 1.2241 mL 2.4483 mL 50 mM 0.0490 mL 0.2448 mL 0.4897 mL 摩爾濃度計(jì)算器 稀釋計(jì)算器 分子量計(jì)算器 Research Area 客戶使用Selleck產(chǎn)品的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)(2) 點(diǎn)擊放大 Dose response curve of compound on melanoma cell lines. Compound was dissolved in DMSO, added in a 5-fold dilution series, starting with 10 μM, and incubated for 72 hours. Fluorescence was measured after 8 hours incubation in resazurin. Data was normalized to DMSO (maximal viability) and Doxorubicin (minimum viability). 評(píng)級(jí) 數(shù)據(jù)來(lái)源于 One customer. AZD6482購(gòu)于Selleck 方法 Cell growth inhibition assay 細(xì)胞系 Melanoma cell lines 濃度 0.00000512-10 μM 處理時(shí)間 72 h 結(jié)果 AZD6482 treatment inhibited Melanoma cells growth in a does-dependent manner.