馬斯亮藍(lán)(Coomassie brilliant blue)是兩種相似三苯甲烷染料的總稱,有G250和R250兩種,結(jié)構(gòu)上前者比后者多了2個(gè)甲基,命名上 “G”為Green 的縮寫,因G250的藍(lán)色染料泛淺綠色;命名上“R”為Red的縮寫,因R250的藍(lán)色染料呈微紅色調(diào);“250”表示考馬斯亮藍(lán)的純度。生化實(shí)驗(yàn)中常將考馬斯亮藍(lán)用于蛋白定量和蛋白電泳中蛋白染色。工作原理是:通過(guò)與蛋白質(zhì)內(nèi)的氨基和羧基基團(tuán)間的靜電結(jié)合作用以及范德華力,考馬斯亮藍(lán)與蛋白質(zhì)形成強(qiáng)但非共價(jià)鍵連接的復(fù)合物。蛋白-染料復(fù)合物的形成穩(wěn)定染料攜帶的負(fù)電荷陰離子(如磺酸基),從而產(chǎn)生在膜上或者膠上肉眼可見的藍(lán)色。
考馬斯亮藍(lán)R250(Coomassie brilliant blue R250)更多用于電泳蛋白的染色,染色靈敏度比氨基黑高5倍,可達(dá)0.1µg蛋白。R250染色后需要褪色,才能進(jìn)行蛋白條帶的觀察。
考馬斯亮藍(lán)G250的檢測(cè)靈敏度雖然較低,但也可替代R250,使用一種快速而簡(jiǎn)單的方法進(jìn)行蛋白染色。因其具有以下特性,即在低于pH 2.0時(shí),溶液無(wú)色;pH 7.0時(shí)溶液呈深藍(lán)黑色;若發(fā)生酸化,溶液呈現(xiàn)透明的棕褐色。當(dāng)G250與蛋白結(jié)合,溶液又回到藍(lán)色,主要因?yàn)榈鞍追肿又車哂懈行缘膒H環(huán)境。合適條件下,當(dāng)把膠放在酸化的G250溶液中染色,顯示出藍(lán)色的蛋白條帶,背景呈淺琥珀色。此種方法條帶快速顯色,且背景顏色也很淺使得條帶看起來(lái)很清楚,則不需要做褪色處理。大部分蛋白用G250檢測(cè)的下限是0.5µg。雖然靈敏度降低,取而代之的是操作快速以及方便,比R250染色節(jié)省高達(dá)11 h。
G250還可通過(guò)“Bradford method”用于蛋白質(zhì)定量。
英文名稱:Coomassie brilliant blue G250;Brilliant blue G;Serva blue G;Coomassie brilliant blue G;Brilliant indocyanin G;Brilliant blue G 250;Acid blue 90;C.I. 42655
其他名稱:考馬斯亮蘭G250;酸性藍(lán)90;考馬斯亮藍(lán)G;康美賽藍(lán)G250;酸性艷藍(lán)G;亮藍(lán)
CAS號(hào):6104-58-1
C47H48N3NaO7S2=854.02
級(jí)別:High purity grade
EM(595nm,H2O):>36300
生物染色試驗(yàn):合格
性狀:暗藍(lán)-紫-棕色結(jié)晶粉末。溶于乙醇和熱水呈亮藍(lán)色,微溶于冷水。與濃硫酸顯血紅色,經(jīng)稀釋變?yōu)槌燃t色,水溶液加入氫氧化鈉顯紫色。水中溶解度:40 g/L (20℃)。吸收波長(zhǎng) 610nm。有刺激性
用途:生化研究。用于膠電泳蛋白染色。不用滲透到膠里就比萘酚藍(lán)黑B1(Naphthol Blue Black B1)靈敏度高3倍,簡(jiǎn)單而又靈敏;可以進(jìn)行各種蛋白檢測(cè),和勞里反應(yīng)相牽連的化學(xué)物質(zhì)和游離氨基酸對(duì)此蛋白染色檢測(cè)無(wú)任何影響。也是P2X7嘌呤能受體激動(dòng)劑
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