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質(zhì)粒小量提取試劑盒,Plasmid Mini Preparation Kit
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質(zhì)粒小量提取試劑盒

價(jià)格 詢價(jià)
包裝 50T 100T
最小起訂量 50T
發(fā)貨地 湖北
更新日期 2024-12-16
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產(chǎn)品詳情

中文名稱:質(zhì)粒小量提取試劑盒英文名稱:Plasmid Mini Preparation Kit
保存條件: 常溫儲(chǔ)存純度規(guī)格: 99%
產(chǎn)品類別: 試劑
含量: 99%包裝: 50T | 100T
外觀: 液體
2024-12-16 質(zhì)粒小量提取試劑盒 Plasmid Mini Preparation Kit 50T/RMB;100T/RMB 常溫儲(chǔ)存 99% 試劑

名稱 質(zhì)粒小量提取試劑盒(Plasmid Mini Preparation Kit)
規(guī)格 50T | 100T
存儲(chǔ) 室溫保存,一年有效。

產(chǎn)品組分 
試劑盒組成 50T 100T 儲(chǔ)存條件
RNase A 300ul 500ul -20℃
溶液Ⅰ 15ml 30ml RT
溶液Ⅱ 15ml 30ml RT
溶液Ⅲ 20ml 40ml RT
漂洗液 15ml 15ml×2 RT
洗脫液 15ml 30ml RT
吸附柱 50個(gè) 100個(gè) RT
收集管 50個(gè) 100個(gè) RT
說(shuō)明書(shū) 1份 1份 RT


產(chǎn)品簡(jiǎn)介 

本試劑盒采用堿裂解法裂解細(xì)胞,根據(jù)離心吸附柱在高鹽狀態(tài)下特異性地結(jié)合溶液中的DNA的原理特異性提取質(zhì)粒DNA。 離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料能高效、專一地吸附DNA,可限度去除雜質(zhì)蛋白及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物。 使用本試劑盒提取的質(zhì)粒DNA可適用于各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR、測(cè)序、連接和轉(zhuǎn)化等試驗(yàn)。

使用前請(qǐng)先在漂洗液中加入無(wú)水乙醇,加入體積請(qǐng)參照瓶體上的標(biāo)簽。溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA(將試劑盒中提供的 RNaseA 全部加入),混勻,置于 2-8℃保存。如非指明,所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心。


使用步驟 

1、取1-5ml細(xì)菌培養(yǎng)物,12000rpm離心1min,盡量吸除上清(菌液較多時(shí)可以通過(guò)多次離心將菌體沉淀收集到一個(gè)離心管中)。

2、向留有菌體沉淀的離心管中加入250ul溶液Ⅰ(請(qǐng)先檢查是否已加入RNaseA),使用移液器或旋渦振蕩器徹底懸浮細(xì)菌細(xì)胞沉淀。
*注意:如果菌塊未徹底混勻,會(huì)影響裂解導(dǎo)致質(zhì)粒提取量和純度偏低。

3、向離心管中加入250ul溶液Ⅱ,溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8次使菌體充分裂解。注意:混勻一定要溫和,以免污染細(xì)菌基因組DNA,此時(shí)菌液應(yīng)變得清亮粘稠,作用時(shí)間不要超過(guò)5 min,以免質(zhì)粒受到破壞。

4、向離心管中加入350ul溶液Ⅲ,立即溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8次,充分混勻,此時(shí)會(huì)出現(xiàn)白色絮狀沉淀。12000rpm離心10 min,用移液器小心地將上清轉(zhuǎn)移到另一個(gè)干凈的離心管中,盡量不要吸出沉淀。注意:溶液Ⅲ加入后應(yīng)立即混合,避免產(chǎn)生局部沉淀。如果上清中還有微小白色沉淀,可再次離心后取上清。

5、將上一步所得上清液加入吸附柱中(吸附柱加入收集管中),室溫放置2min,12000rpm離心1min,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

6、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇),12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。

7、向吸附柱中加入500ul漂洗液,12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。

8、12000rpm離心2min,將吸附柱敞口置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,否則漂洗液中的乙醇會(huì)影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR等。

9、將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中,向吸附膜中央懸空滴加50-200ul經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的洗脫液,室溫放置2min,12000rpm離心1min。

10、為了增加質(zhì)粒的回收效率,可將得到的洗脫液重新加入吸附柱中,室溫放置2min,12000rpm離心1min。

注意事項(xiàng) 

1. 使用前請(qǐng)先檢查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出現(xiàn)混濁,如有混濁現(xiàn)象,可在37℃水浴中加熱幾分鐘,待溶液恢復(fù)澄清后再使用。溶液Ⅱ 、溶液Ⅲ和漂洗液使用后應(yīng)立即擰緊蓋子。

2. 洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于50ul,體積過(guò)小影響回收效率;洗脫液的pH值對(duì)洗脫效率也有影晌,若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)至此范圍), pH值低于7. 0會(huì)降低洗脫效率, DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,以防DNA降解。

3. 如果所提質(zhì)粒為低拷貝質(zhì)?;虼笥?0kb的大質(zhì)粒,應(yīng)加大菌體使用量,使用5-10ml過(guò)夜培養(yǎng)物,同時(shí)按照比例增加溶液Ⅰ 、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的用量,吸附和洗脫時(shí)可以適當(dāng)?shù)难娱L(zhǎng)時(shí)間,以增加提取效率。

4. DNA濃度及純度檢測(cè):得到的質(zhì)粒DNA純度與樣品保存時(shí)間、操作過(guò)程中的剪切力等因素有關(guān)。 得到的DNA可用瓊脂糖疑膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。 DNA應(yīng)在OD260處有顯著吸收峰,OD260值為1相當(dāng)于大約50ug/ml雙鏈DNA、 40ug/ml單鏈DNA。OD260/OD280比值應(yīng)為1.7-1.9,如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液,而使用去離子水,比值會(huì)偏低,因?yàn)閜H值和離子存在會(huì)影響吸光值,但并不表示純度低。

關(guān)鍵字: 質(zhì)粒小量提取試劑盒

公司簡(jiǎn)介

康迪斯化工(湖北)有限公司是一家立足于生命科學(xué)領(lǐng)域有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的高新技術(shù)企業(yè),主要從事生物試劑的研發(fā)與生產(chǎn),并以持續(xù)探索和開(kāi)發(fā)生命科學(xué)技術(shù)為動(dòng)力,致力于為科研工作者提供實(shí)用、高效的科研試劑,為生命科學(xué)的研究與發(fā)展提供有意義的幫助。
成立日期 2019-03-14 (6年) 注冊(cè)資本 200萬(wàn)
員工人數(shù) 10-50人 年?duì)I業(yè)額 ¥ 1000萬(wàn)-5000萬(wàn)
主營(yíng)行業(yè) 無(wú)機(jī)化工,中間體,生物化工,有機(jī)原料,化學(xué)試劑 經(jīng)營(yíng)模式 貿(mào)易,工廠,試劑
  • 康迪斯化工(湖北)有限公司
VIP 6年
  • 公司成立:6年
  • 注冊(cè)資本:200萬(wàn)
  • 企業(yè)類型:生產(chǎn)經(jīng)銷
  • 主營(yíng)產(chǎn)品:異氰酸酯,聚硫橡膠,潤(rùn)滑油
  • 公司地址:江岸經(jīng)濟(jì)開(kāi)發(fā)區(qū)石橋科技產(chǎn)業(yè)園5棟
詢盤(pán)

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