名稱(chēng) Western Blot一抗二抗去除液(強(qiáng)堿性) 規(guī)格 250 mL 保存 室溫保存,兩年有效。 產(chǎn)品簡(jiǎn)介 Western一抗二抗去除液(Stripping buffer),用于Western中轉(zhuǎn)移了蛋白的膜的重復(fù)利用。在Western中完成了一抗二抗結(jié)合和后續(xù)的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)后,有時(shí)還需要檢測(cè)tubulin、actin等表達(dá)量相對(duì)穩(wěn)定的蛋白作為參照,或檢測(cè)其它蛋白進(jìn)行比較。通過(guò)使用一抗二抗去除液,充分去除一抗二抗,可以非常方便地重新利用使用過(guò)的膜檢測(cè)其它蛋白。和重新跑一個(gè)SDS-PAGE膠相比,不僅省時(shí)省力,而且可以消除重新上樣而帶來(lái)的誤差,使可比性更強(qiáng)。 使用Western一抗二抗去除液多次重復(fù)使用同一張膜,會(huì)導(dǎo)致蛋白信號(hào)的減弱。本W(wǎng)estern一抗二抗去除液,經(jīng)過(guò)多個(gè)抗體的檢測(cè)試驗(yàn),通??梢灾貜?fù)利用膜3-5次。 使用本試劑只需大約15-20分鐘即可實(shí)現(xiàn)蛋白膜的重復(fù)使用,然后可以進(jìn)行封閉等后續(xù)的Western操作。 Phygene的不同的Western一抗二抗去除液主要在去除結(jié)合的一抗二抗的原理方面略有不同。分別依靠去垢劑、酸性、堿性、還原劑、螯合劑、鹽濃度以及一些特殊試劑等的不同組合來(lái)解除一抗二抗的結(jié)合,同時(shí)又不會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)移到膜上的蛋白的損失。 使用說(shuō)明 1. 在完成Western化學(xué)發(fā)光檢測(cè)后,蒸餾水中漂洗5分鐘。 2. 棄蒸餾水,加入適量的Western一抗二抗去除液(強(qiáng)堿性),至少需把膜完全覆蓋。在搖床上漂洗5分鐘。 3. 棄Western一抗二抗去除液(強(qiáng)堿性),加入蒸餾水漂洗一次。然后再加入足量蒸餾水,在搖床上漂洗5分鐘。 4. 進(jìn)行封閉(blocking)等Western的后續(xù)操作。 注意事項(xiàng) 1、使用辣根過(guò)氧化物酶(HRP),任何一次封閉(blocking)都應(yīng)當(dāng)使用5%脫脂牛奶,如果使用堿性磷酸酯酶,任何一次封閉都應(yīng)當(dāng)使用酪蛋白(casein)。 2、為取得效果,推薦使用PVDF膜。但硝酸纖維素膜也可以使用本W(wǎng)estern一抗二抗去除液。 3、使用ECL等類(lèi)似的化學(xué)發(fā)光試劑進(jìn)行的Western檢測(cè)適用本試劑。使用非化學(xué)發(fā)光試劑進(jìn)行的Western檢測(cè),例如DAB,NBT/BCIP,不適用于本試劑。 4、本W(wǎng)estern一抗二抗去除液有輕微腐蝕性,使用時(shí)請(qǐng)注意防護(hù)。 5、為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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