產(chǎn)品說明：

伊文斯蘭(Evans Blue)又稱偶氮藍(lán)。伊文斯蘭與臺盼藍(lán)都是細(xì)胞活性染料，常用于檢測細(xì)胞膜的完整性和細(xì)胞是否存活。活細(xì)胞因有外排功能而無法被伊文斯蘭染成藍(lán)色，而死細(xì)胞會被染成淡藍(lán)色。因此可以通過此方法在顯微鏡下區(qū)分死細(xì)胞與活細(xì)胞，但無法區(qū)分死亡與壞死。

操作說明：（僅供參考）

(一)血腦屏障通透性

1、 取處理后的實驗動物(以小鼠為例)，靜脈注射 Evans Blue Stain (0.5%)，小鼠眼睛、皮膚出現(xiàn)藍(lán)色。0.5～1h 后處死小鼠，取目的腦組織。

2、 腦組織置于 1.5ml 離心管中，加入 1ml PBS， 迅速用組織勻漿器將腦組織制成勻漿, 離心。

3、 取上清，加入等量三氯乙酸，4℃孵育。該步驟亦可采用如下操作: 取上清，按上清:丙酮=3:7比例加入丙酮，室溫孵育 24h。

4、 離心 15min。

5、 取上述溶液，用分光光度計測 620 nm 處吸光值(OD 值)。同時測定已知不同梯度的標(biāo)準(zhǔn)依文思藍(lán)的 OD 值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出待測樣品的伊文斯蘭含量。

(二)活細(xì)胞染色

1、取 100μl 重懸細(xì)胞到常規(guī)離心管內(nèi)，入 100μl Evans Blue Stain 輕輕混勻染色(染色時間可適當(dāng)延長，但不宜超過 10min)。

2、吸取少量經(jīng)過染色后的細(xì)胞，用血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)。通常如果要比較精確地進(jìn)行定量，每個細(xì)胞樣品至少數(shù) 500 個細(xì)胞，數(shù)出藍(lán)色細(xì)胞和細(xì)胞總數(shù)。細(xì)胞存活率計算公式如下：細(xì)胞存活率＝(細(xì)胞總數(shù)－藍(lán)色細(xì)胞數(shù))/細(xì)胞總數(shù)×100%

注意事項：

1、 Evans Blue Stain 對人體有輕微毒性，請小心防護(hù)。
2、 細(xì)胞染色時，注意凋亡小體偶爾也有拒染現(xiàn)象。
3、 血腦屏障通透性實驗中，Evans Blue Stain 注射量應(yīng)根據(jù)不同動物以及動物的重量調(diào)整。
4、 采用低溫冷凍離心機(jī)進(jìn)行離心。
5、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

T-1824 or Evans blue, often incorrectly rendered as Evan's blue, is an azo dye that has a very high affinity for serum albumin. Because of this, it can be useful in physiology in estimating the proportion of body water contained in blood plasma. It fluoresces with excitation peaks at 470 and 540 nm and an emission peak at 680 nm.

Evans blue dye has been used as a viability assay on the basis of its penetration into non-viable cells, although the method is subject to error because it assumes that damaged or otherwise altered cells are not capable of repair and therefore are not viable.

Evans blue is also used to assess the permeability of the blood–brain barrier to macromolecules. Because serum albumin cannot cross the barrier and virtually all Evans blue is bound to albumin, normally the neural tissue remains unstained. When the blood–brain barrier has been compromised, albumin-bound Evans blue enters the CNS.

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