T4 DNA Ligase即T4 DNA連接酶，可以催化粘端或平端雙鏈DNA或RNA的5'-P末端和3'-OH末端之間以磷酸二酯鍵結(jié)合，該催化反應(yīng)需ATP作為輔助因子。同時T4 DNA 連接酶可以修補(bǔ)雙鏈DNA、雙鏈RNA或DNA/RNA雜合物上的單鏈缺刻(single-strand nicks)。
用途：T4 DNA Ligase常用于DNA片段和載體、linker或adaptor等的連接。也可以用于缺刻修復(fù)及Ligase介導(dǎo)的RNA檢測。
來源：本T4 DNA Ligase由大腸桿菌表達(dá)，表達(dá)基因的來源為T4嗜菌體。
活性定義：One unit is defined as the amount of enzyme required to give 50% ligation of HindIII fragments of lambda DNA in 30 min at 16℃ in 20 μl of the assay mixture containing 50 mM Tris, pH 7.5, 10 mM MgCl2, 10 mM DTT, 1 mM ATP, 25 μg/ml BSA and a 5'-DNA termini concentration of 0.12 μM (300 μg/ml)。200U等于1個Weiss unit，以Weiss unit計，本產(chǎn)品共200單位。
保存條件：-20℃保存。
注意事項：
對于普通的轉(zhuǎn)化大腸桿菌的操作，不必對連接產(chǎn)物進(jìn)行純化，連接產(chǎn)物可以直接用于轉(zhuǎn)化。但用電轉(zhuǎn)方法轉(zhuǎn)化大腸桿菌時，通常宜先用DNA純化試劑盒或酚氯仿抽提方法等純化DNA，然后再進(jìn)行電轉(zhuǎn)。
由于平末端連接體系中，T4 ligase用量較大，若要提高電轉(zhuǎn)實驗效率，推薦65℃孵育10分鐘或70℃孵育5分鐘以滅活T4 DNA Ligase后，用DNA產(chǎn)物純化試劑盒或氯仿抽提對連接后的DNA片段進(jìn)行純化后才能進(jìn)行電擊轉(zhuǎn)化。T4 DNA Ligase可以進(jìn)行平端連接，但效率較低。
普通連接反應(yīng)不必進(jìn)行凝膠電泳觀察。如果需要對于連接產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳觀察，推薦先在65℃孵育10分鐘使
T4 DNA Ligase失活，以避免T4 DNA Ligase和DNA結(jié)合導(dǎo)致的條帶位置遷移(band shift)。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
關(guān)鍵字： T4連接酶
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