名稱 G418溶液（Geneticin，20mg/ml）
規(guī)格 10ml
保存 -20℃ 避光保存，有效期24個(gè)月

產(chǎn)品簡(jiǎn)介 

新霉素(geneticin, G418)又稱遺傳霉素，是一種氨基糖苷類抗生素, 是細(xì)胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染最常用的抗性篩選試劑。G418能阻斷蛋白質(zhì)合成，對(duì)細(xì)菌、酵母、高等植物以及哺乳動(dòng)物細(xì)胞均具有氨基糖苷類毒性，用于真核細(xì)胞從轉(zhuǎn)座子Tn5和Tn601穩(wěn)定轉(zhuǎn)染新霉素(neo)抗性基因的選擇和維持。經(jīng)常用于基因轉(zhuǎn)移、基因敲除、抗性篩選以及轉(zhuǎn)基因動(dòng)物等方面。 

G418溶液經(jīng)過(guò)濾除菌，一般工作濃度為50～1000ug/ml不等，然而不同類型的細(xì)胞需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)確定濃度。在具有相對(duì)穩(wěn)定基因組的細(xì)胞(如CHO細(xì)胞)中，一旦篩選出穩(wěn)定細(xì)胞株后，無(wú)需加入G418繼續(xù)培養(yǎng)。

Phygene G418溶液主要由G418、HEPES等組成，過(guò)濾除菌。

G418溶液已經(jīng)0.22μm抽濾除菌，可以直接使用。

操作步驟 （僅供參考）

1、 由于每種細(xì)胞對(duì)G418的敏感性不同，而且不同批次的G418的活性液不同，所以在篩選之前，需要確定G418的篩選濃度，一般在50～1000μg/ml 范圍內(nèi)進(jìn)行篩選。
2、 將細(xì)胞制備成細(xì)胞懸液，并稀釋到1000個(gè)/ml。
3、 加入不同量的G418 solution (20mg/ml)，選擇在10~14天內(nèi)使細(xì)胞全部死亡的最低G418濃度來(lái)進(jìn)行下一步的篩選試驗(yàn)。

注意事項(xiàng) 

1、 盡量減少反復(fù)凍融的次數(shù)，以免失效。 
2、 基因轉(zhuǎn)染到細(xì)胞內(nèi)要一段時(shí)間才能表達(dá)出蛋白質(zhì), 所以篩選不能太早。 
3、 篩選也不宜太遲，一般要在轉(zhuǎn)染24h之后才開(kāi)始加G418篩選。因?yàn)檗D(zhuǎn)染了外源基因的細(xì)胞代謝負(fù)荷較大，增值較慢，時(shí)間長(zhǎng)了就會(huì)被沒(méi)有外源基因轉(zhuǎn)入的細(xì)胞所淹沒(méi)，最終導(dǎo)致篩選不出陽(yáng)性克隆。 
4、 隨著細(xì)胞代謝，G418的濃度和活性都會(huì)下降，應(yīng)每3~5天更換一次含有G418的篩選液，這時(shí)藥物濃度可以降至200μg/ml。
5、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。