名稱 蘇木素伊紅(HE)染色試劑盒
   Haematoxylin Eosin (H&E) staining

規(guī)格 2×100mL | 2×500mL

存儲(chǔ) 室溫避光保存，有效期12個(gè)月

自備材料：

1、鹽酸乙醇分化液
2、藍(lán)化液（如稀氨水、碳酸鋰溶液等）
3、系列乙醇
4、4%的多聚甲醛 (Cat#: PH0427)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

蘇木精-伊紅染色法 ( Hematoxylin-Eosin staining )，簡(jiǎn)稱 HE 染色法 ，是病理學(xué)常規(guī)制片中最基本的染色方法。蘇木精染液為堿性 ，主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍(lán)色；伊紅為酸性染料，主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色 。

染色過(guò)程需要優(yōu)化，著色情況與組織或細(xì)胞的種類有關(guān)，也隨其生活周期及病理變化而改變。例如，很多細(xì)胞在新生時(shí)期胞漿對(duì)伊紅著色較淡或輕度嗜堿，當(dāng)其衰老時(shí)或發(fā)生退行性變則呈現(xiàn)嗜伊紅濃染。膠原纖維在老化和出現(xiàn)透明變性時(shí)，伊紅著色由淺變深。

染色原理：

1、 細(xì)胞核染色的原理：  蘇木素為堿性天然染料，可使細(xì)胞核著色。細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)的成分主要是DNA，在DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)中，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外，使DNA雙螺旋的外側(cè)帶負(fù)電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木素堿性染料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色。蘇木素在堿性溶液中呈藍(lán)色，所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色。

2、 細(xì)胞漿染色的原理：  伊紅是一種化學(xué)合成的酸性染料，在一定條件下可使細(xì)胞漿著色。細(xì)胞漿的主要成分是蛋白質(zhì)，為兩性化合物，細(xì)胞漿的染色與染液的pH值密切相關(guān)。當(dāng)染液的pH值在胞漿蛋白質(zhì)等電點(diǎn)(4.7～5.0)以下時(shí)，胞漿蛋白質(zhì)以堿式電離，則細(xì)胞漿帶正電荷，就可被帶負(fù)電荷的酸性染料染色。伊紅在水中離解成帶負(fù)電荷的陰離子，與胞漿蛋白質(zhì)帶正電荷的陽(yáng)離子結(jié)合，使細(xì)胞漿著色，呈現(xiàn)紅色。

3、 分化作用：  染色后，用某些特定的溶液將組織過(guò)多結(jié)合的染色劑脫去，這個(gè)過(guò)程稱為分化作用，所用的溶液稱為分化液。在HE染色中常用1%鹽酸乙醇作為分化液，因酸能破壞蘇木素的醌型結(jié)構(gòu)，使組織與色素分離而退色。經(jīng)蘇木素染色后，必須用1%鹽酸乙醇分化，使細(xì)胞核過(guò)多結(jié)合的蘇木素染料和細(xì)胞漿吸附的蘇木素染料脫去，再進(jìn)行伊紅染色，才能保證細(xì)胞核與細(xì)胞漿染色的分明。

4、 返藍(lán)作用：分化之后，蘇木素在酸性條件下處于紅色離子狀態(tài)，呈紅色；在堿性條件下處于藍(lán)色離子狀態(tài)，呈藍(lán)色。組織切片經(jīng)酸性乙醇分化后呈紅色或粉紅色，故分化之后，立即用水除去組織切片上的酸而中止分化，再用弱堿性水使蘇木素染上的細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色，這個(gè)過(guò)程稱為返藍(lán)作用或藍(lán)化作用。另外用自來(lái)水浸洗也可使細(xì)胞核返藍(lán)，但所需時(shí)間較長(zhǎng)。

使用方法

操作步驟（僅供參考）：

（一） 石蠟切片染色

1、 切片脫蠟至水

①二甲苯作用2次，每次5～10min。 
②（可選）無(wú)水乙醇作用2次，每次3～5min。                       
③95%的乙醇 3～5min
④90%的乙醇 3～5min
⑤80%的乙醇 3～5min
⑥自來(lái)水或蒸餾水沖洗 1～3min

2、染色

①蘇木素染色液染色 5～8min (具體時(shí)間根據(jù)染色結(jié)果和實(shí)驗(yàn)要求調(diào)整)
②自來(lái)水或蒸餾水沖洗 5～10s
③鹽酸乙醇分化（可選） 2～5s
④自來(lái)水沖洗 20～30s
⑤藍(lán)化液返藍(lán) 20～40s
⑥自來(lái)水沖洗 30～60s
⑦伊紅染色液染色 3～5min (具體時(shí)間根據(jù)染色結(jié)果和實(shí)驗(yàn)要求調(diào)整)
⑧自來(lái)水沖洗 1～5s

2、脫水、透明、封固

①80%乙醇 10～20s 
②90%乙醇 10～20s
③95%乙醇作用2次，每次1～2min。
④無(wú)水乙醇作用2次，每次2～3min。
⑤二甲苯透明3次，每次2～3min。
⑥中性樹(shù)脂封片。

染色結(jié)果：細(xì)胞核呈藍(lán)色；細(xì)胞質(zhì)、肌纖維、膠原纖維、甲狀腺膠質(zhì)等呈深淺不一的紅色；角蛋白、紅細(xì)胞等呈明亮的橙紅色。

 
（二） 冰凍切片染色

冰凍切片不用脫蠟，可固定后直接染色，其方法與石蠟切片相同。

染色結(jié)果：細(xì)胞核呈藍(lán)色；細(xì)胞質(zhì)、纖維呈紅色。

 
（三） 細(xì)胞染色

1、4%的多聚甲醛固定10～20min。
2、自來(lái)水沖洗2次，每次2min。
3、 蒸餾水沖洗2次，每次2min。 
4、染色、脫蠟、透明、封固步驟同石蠟切片的染色步驟，作用時(shí)間相應(yīng)縮短。

染色結(jié)果：細(xì)胞核呈藍(lán)色；細(xì)胞質(zhì)、纖維呈紅色。

注意事項(xiàng)

1、 切片脫蠟應(yīng)盡量干凈。
2、 95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇應(yīng)經(jīng)常更換新液。
3、 鹽酸乙醇分化液的分化時(shí)間應(yīng)該依據(jù)切片厚薄、組織的類別以及新舊而定，另外分化后自來(lái)水沖洗時(shí)間應(yīng)該足夠，以便徹底清洗酸。
4、 染色過(guò)程推薦淺染，通常只需能夠分辨細(xì)胞核即可，顏色過(guò)深有可能影響細(xì)胞質(zhì)顏色。
5、 冷凍切片染色時(shí)間盡量要短。
6、 藍(lán)化液常使用0.2～1%氨水水溶液或Scoot促藍(lán)液或0.1～1%碳酸鋰水溶液。
7、次使用本試劑盒時(shí)建議先取1-2個(gè)樣品做預(yù)實(shí)驗(yàn)。
8、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。