小鼠黑色素瘤細(xì)胞(B16)?
細(xì)胞特性1)?
來源:小鼠黑色素瘤
2)?
形態(tài):成纖維細(xì)胞樣,貼壁生長(zhǎng)
3)?
含量:>1x10
6 個(gè)/mL
4)?
污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5)?
規(guī)格:T75瓶或者1mL凍存管包裝
?
運(yùn)輸和保存:使用T25瓶充液發(fā)送活細(xì)胞。收到細(xì)胞后,請(qǐng)先在顯微鏡下檢查細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),并將T25瓶置于培養(yǎng)箱約6h或過夜后,再次檢查細(xì)胞狀態(tài)。若狀態(tài)良好,可按照以下細(xì)胞培養(yǎng)步驟進(jìn)行細(xì)胞后續(xù)處理操作。若發(fā)現(xiàn)可疑污染物,請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。
?
細(xì)胞用途:僅供科研使用。
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細(xì)胞培養(yǎng)步驟一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:1)?準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO
3?1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉?0.11g/L),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)?培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)?凍存液:90%完全培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二.?
細(xì)胞處理:1)?復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)?細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1.?棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.?加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.?按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.?將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
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注意事項(xiàng): 1.?收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。
2. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
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