小鼠黑色素瘤細(xì)胞(B16)?
細(xì)胞特性1）?
來源：小鼠黑色素瘤
2）?
形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣，貼壁生長
3）?
含量：>1x10
6 個/mL
4）?
污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性
5）?
規(guī)格：T75瓶或者1mL凍存管包裝
?
運(yùn)輸和保存：使用T25瓶充液發(fā)送活細(xì)胞。收到細(xì)胞后，請先在顯微鏡下檢查細(xì)胞生長狀態(tài)，并將T25瓶置于培養(yǎng)箱約6h或過夜后，再次檢查細(xì)胞狀態(tài)。若狀態(tài)良好，可按照以下細(xì)胞培養(yǎng)步驟進(jìn)行細(xì)胞后續(xù)處理操作。若發(fā)現(xiàn)可疑污染物，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。
?
細(xì)胞用途：僅供科研使用。
???????????????????????
細(xì)胞培養(yǎng)步驟一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：1）?準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO
3?1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉?0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）?培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）?凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．?
細(xì)胞處理：1）?復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）?細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.?棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.?加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.?按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.?將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
?
注意事項： 1.?收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
2. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
關(guān)注微信，微博，購買產(chǎn)品享受8折優(yōu)惠，贏紅包。參加互動，贏支原體檢測試劑盒！
微信? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ????微博