??????碧云天的Mouse IL-10 ELISA Kit (Human Interleukin-10 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人白細(xì)胞介素10酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測人血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的IL-10的ELISA試劑盒。
??????本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測結(jié)果表明，最小檢出量為8.8pg/ml，與人IL-10 sRα、IL-10 Rβ、IL-22、IL-24、小鼠IL-10、貓IL-10等均沒有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
??????IL-10即白細(xì)胞介素-10(簡稱白介10)，又稱細(xì)胞因子合成抑制因子(CSIF)，屬于IL-10 α螺旋細(xì)胞因子家族中的一員，該家族還包括IL-19、IL-20、IL-22、IL-24和IL-26/AK155。IL-10通常由活化的造血細(xì)胞分泌，此外肝星狀細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞和胚胎滋養(yǎng)葉細(xì)胞也能分泌IL-10。小鼠細(xì)胞能夠響應(yīng)人IL-10，而小鼠的IL-10并不能作用于人源細(xì)胞上。成熟的人IL-10與馬IL-10具有86%的氨基酸同源性，與牛、犬、馬、貓、豚鼠、小鼠、綿羊、豬和大鼠的IL-10具有72-80%的氨基酸同源性。成熟的IL-10分子量在36kDa，其包含兩個(gè)鏈內(nèi)二硫鍵，以非共價(jià)二聚體的形式存在。
??????IL-10受體復(fù)合物由兩部分組成：IL-10 Rα，分子量為110kDa的跨膜糖蛋白，主要表達(dá)在淋巴細(xì)胞，自然殺傷細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、腸內(nèi)皮細(xì)胞、胚胎滋養(yǎng)葉細(xì)胞和活化的肝星狀細(xì)胞；IL-10?Rβ同樣為跨膜蛋白，分子量在75kDa，在多種細(xì)胞上都有表達(dá)。IL-10二聚體與兩條IL-10 Rα鏈結(jié)合，隨后招募兩條IL-10 Rβ鏈。IL-10 Rβ并不能直接與IL-10結(jié)合，但它在信號(hào)傳導(dǎo)過程中起重要作用。IL-10 Rβ同時(shí)還是IL-22、IL-26、IL-28和IL-29的受體組成部分。
??????IL-10對免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)有刺激和抑制兩方面的作用。IL-10能抑制Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞的活化和擴(kuò)增，能促進(jìn)M2型巨噬細(xì)胞的產(chǎn)生。Treg細(xì)胞和調(diào)節(jié)性B細(xì)胞分泌的IL-10對Treg細(xì)胞的生長起重要作用，然而在腫瘤微環(huán)境中，IL-10則會(huì)抑制Treg細(xì)胞的擴(kuò)增。IL-10可以促進(jìn)CD8⁺ T細(xì)胞在腫瘤部位的蓄積和擴(kuò)增，IL-10在Sjogren’s 綜合征、原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤和卵巢癌中表達(dá)上升。
??????IL-10與受體復(fù)合物結(jié)合后首先導(dǎo)致JAK1和YTK2的磷酸化，隨后使得STAT1和STAT3發(fā)生磷酸化。磷酸化的STAT3形成二聚體進(jìn)入細(xì)胞核對靶基因進(jìn)行調(diào)控。
??????本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中人IL-10的濃度，其原理見圖1。人IL-10特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的人IL-10會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗人IL-10抗體后，生物素化抗人IL-10抗體與人IL-10結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin(HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會(huì)催化無色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標(biāo)儀檢測450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測。人IL-10濃度與A450值呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中靶蛋白濃度。

圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。

??????一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測，可以進(jìn)行96次檢測。
包裝清單：

保存條件：
??????除標(biāo)準(zhǔn)品外，4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。
注意事項(xiàng)：
??????由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
??????洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
??????為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
??????TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
??????加樣時(shí)，請注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
??????不宜混用不同批號(hào)的試劑盒組份，每批次試劑盒均經(jīng)過獨(dú)立測試。
??????充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
??????本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致最終檢測到的吸光度顯著下降。
??????洗滌過程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
??????檢測標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
??????加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。