??????pET-Dual-N-GST是一種用于在大腸桿菌中高效共表達兩種目的蛋白的質(zhì)粒，其中一種蛋白可以帶上GST標簽(Glutathione?S-transferase?tag,?GST?tag)。本質(zhì)粒包含兩個多克隆位點(MCS)，每個多克隆位點前都有一個T7啟動子/lac操作子和一個核糖體結(jié)合位點 (rbs)，因此都可以在異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的誘導(dǎo)下高效啟動目的蛋白的表達。本質(zhì)粒為氨芐青霉素抗性。
??????在共表達兩個蛋白的復(fù)合物時，通常宜把較難表達的基因克隆到個多克隆位點，并在其N端引物設(shè)計時加入PreScission蛋白酶識別的八肽序列(LEVLFQGP)，宜把較易表達的基因克隆到第二個多克隆位點。這樣通過GST柱純化，可分離純化獲得帶有GST標簽的蛋白復(fù)合物，配合使用碧云天生產(chǎn)的PreScission Protease (P2302/P2303) 4℃酶切過夜，第二天收集穿柱液即可獲得蛋白復(fù)合物，這為后續(xù)進行蛋白復(fù)合物的功能檢測、蛋白結(jié)晶等工作帶來了極大的便利。PreScission蛋白酶酶切發(fā)生在八肽序列的Q和G之間，因此在酶切去除GST標簽的時候會在目的蛋白的N端留下兩個額外的氨基酸殘基GP。當(dāng)然，本質(zhì)粒也可以只在個多克隆位點插入目的基因，這樣就會僅表達一個含有N端GST標簽的目的蛋白。
??????pET-Dual-N-GST質(zhì)粒的主要信息如下：

??????pET-Dual-N-GST質(zhì)粒(6044bp)的圖譜如下：

??????pET-Dual-N-GST的多克隆位點的詳細圖譜如下：

??????pET-Dual-N-GST中沒有的酶切位點(Restriction enzymes that do not cut pET-Dual-N-GST)包括：

??????pET-Dual-N-GST中的單酶切位點(Restriction enzymes that cut pET-Dual-N-GST once)包括：

??????pET-Dual-N-GST質(zhì)粒中推薦使用的測序引物序列如下：
??????MCS1-N Primer (626-647): 5′-GCTATCCCACAAATTGATAAGT-3′
??????MCS1-C Primer (832-813): 5′-GATTATGCGGCCGTGTACAA-3′
??????MCS2-N Primer (813-832): 5′-TTGTACACGGCCGCATAATC-3′
??????T7 terminator Primer (1072-1090): 5′-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′
??????pET-Dual-N-GST的全序列信息：D2931 pET-Dual-N-GST.txt。
??????不同原核表達質(zhì)粒的比較和選擇，以及標簽、蛋白酶切位點和蛋白共表達的考慮可以參考如下網(wǎng)頁：
??????http://www.beyotime.com/support/prokaryotic-plasmids.htm
包裝清單：

保存條件：
??????-20℃保存。
注意事項：
??????本質(zhì)粒未經(jīng)碧云天書面許可不得用于任何商業(yè)用途，也不得移交給訂貨人所在實驗室外的任何個人或單位。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。