pET-Dual-N-GST-PreScission

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最小起訂量	100μg
發(fā)貨地	上海
更新日期	2024-11-05

產(chǎn)品詳情

中文名稱:pET-Dual-N-GST-PreScission	英文名稱:pET-Dual-N-GST-PreScission
有效期: 一年	產(chǎn)品類別: 菌種與質(zhì)粒原核載體

產(chǎn)品編號(hào)	產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品包裝	產(chǎn)品價(jià)格
D2933-100μg	pET-Dual-N-GST-PreScission	100μg	1086.00元

??????pET-Dual-N-GST-PreScission是一種用于在大腸桿菌中高效共表達(dá)兩種目的蛋白的質(zhì)粒，其中一種可以帶上GST標(biāo)簽(Glutathione?S-transferase?tag,?GST?tag)并且GST標(biāo)簽后有PreScission蛋白酶的酶切位點(diǎn)。本質(zhì)粒包含兩個(gè)多克隆位點(diǎn)(MCS)，每個(gè)多克隆位點(diǎn)前都有一個(gè)T7啟動(dòng)子/lac操作子和一個(gè)核糖體結(jié)合位點(diǎn)?(rbs)，因此都可以在異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的誘導(dǎo)下高效啟動(dòng)目的蛋白的表達(dá)。本質(zhì)粒為氨芐青霉素抗性。
??????在共表達(dá)兩個(gè)蛋白的復(fù)合物時(shí)，通常宜把較難表達(dá)的基因克隆到個(gè)多克隆位點(diǎn)，宜把較易表達(dá)的基因克隆到第二個(gè)多克隆位點(diǎn)。這樣通過(guò)GST柱純化，可分離純化獲得帶有GST標(biāo)簽的蛋白復(fù)合物。本質(zhì)粒的N端GST標(biāo)簽與個(gè)多克隆位點(diǎn)之間有PreScission蛋白酶識(shí)別的八肽序列LEVLFQGP，對(duì)應(yīng)核酸序列為CTGGAAGTTCTGTTCCAGGGGCCC，配合使用碧云天生產(chǎn)的PreScission Protease (P2302/P2303) 4℃酶切過(guò)夜，第二天收集穿柱液即可獲得蛋白復(fù)合物，這為后續(xù)進(jìn)行蛋白復(fù)合物的功能檢測(cè)、蛋白結(jié)晶等工作帶來(lái)了極大的便利。PreScission蛋白酶酶切發(fā)生在八肽序列的Q和G之間，因此在酶切去除GST標(biāo)簽的時(shí)候會(huì)在目的蛋白的N端留下兩個(gè)額外的氨基酸殘基GP。當(dāng)然，本質(zhì)粒也可以只在個(gè)多克隆位點(diǎn)插入目的基因，這樣就會(huì)僅表達(dá)一個(gè)含有N端GST標(biāo)簽和PreScission識(shí)別位點(diǎn)的目的蛋白。
??????pET-Dual-N-GST-PreScission質(zhì)粒的主要信息如下：

Feature Nucleotide	Position
T7 transcription start-1	1
GST-taq coding sequence	71-727
PreScission Protease recognation site sequence	728-751
Multiple cloning sites-1(BamH I – NotI)	752-802
T7 promoter-2	859-875
T7 transcription start-2	876
Multiple cloing sites-2(Nde I – XhoI)	943-1004
S Tag coding sequence	1011-1055
T7 terminator	1107-1154
f1 origin	1192-1639
bla(Ap) coding sequence	1764-2621
pBR322 origin	3382
lacI coding sequence	4576-5658
T7 promoter-1	6049-6065

??????pET-Dual-N-GST-PreScission質(zhì)粒(6065bp)的圖譜如下：

??????pET-Dual-N-GST的多克隆位點(diǎn)的詳細(xì)圖譜如下：

	Lacoperator
1	?GGGGAATTGT????GAGCGGATAA????CAATTCCCCT????CTAGAAATAA????TTTTGTTTAA
	?CCCCTTAACA????CTCGCCTATT????GTTAAGGGGA????GATCTTTATT????AAAACAAATT
	rbsGST
51	?CTTTAAGAAG????GAGATATACC????ATGGGCTCCC????CTATACTAGG????TTATTGGAAA
	?GAAATTCTTC????CTCTATATGG????TACCCGAGGG????GATATGATCC????AATAACCTTT
101	?ATTAAGGGCC????TTGTGCAACC????CACTCGACTT????CTTTTGGAAT????ATCTTGAAGA
	?TAATTCCCGG????AACACGTTGG????GTGAGCTGAA????GAAAACCTTA????TAGAACTTCT

151	?AAAATATGAA????GAGCATTTGT ???ATGAGCGCGA????TGAAGGTGAT????AAATGGCGAA
	?TTTTATACTT????CTCGTAAACA????TACTCGCGCT????ACTTCCACTA????TTTACCGCTT

201	?ACAAAAAGTT????TGAATTGGGT????TTGGAGTTTC????CCAATCTTCC????TTATTATATT
	?TGTTTTTCAA????ACTTAACCCA????AACCTCAAAG????GGTTAGAAGG ???AATAATATAA

251	?GATGGTGATG????TTAAATTAAC????ACAGTCTATG????GCCATCATAC????GTTATATAGC
	?CTACCACTAC????AATTTAATTG????TGTCAGATAC????CGGTAGTATG????CAATATATCG

301	?TGACAAGCAC????AACATGTTGG????GTGGTTGTCC????AAAAGAGCGT????GCAGAGATTT
	?ACTGTTCGTG????TTGTACAACC????CACCAACAGG????TTTTCTCGCA????CGTCTCTAAA

351	?CAATGCTTGA????AGGAGCGGTT????TTGGATATTA????GATACGGTGT????TTCGAGAATT
	?GTTACGAACT????TCCTCGCCAA????AACCTATAAT????CTATGCCACA????AAGCTCTTAA

401	?GCATATAGTA????AAGACTTTGA????AACTCTCAAA????GTTGATTTTC????TTAGCAAGCT
	?CGTATATCAT????TTCTGAAACT????TTGAGAGTTT????CAACTAAAAG????AATCGTTCGA

451	?ACCTGAAATG????CTGAAAATGT????TCGAAGATCG????TTTATGTCAT????AAAACATATT
	?TGGACTTTAC????GACTTTTACA????AGCTTCTAGC????AAATACAGTA ???TTTTGTATAA

501	?TAAATGGTGA????TCATGTAACC????CATCCTGACT????TCATGTTGTA????TGACGCTCTT
	?ATTTACCACT????AGTACATTGG????GTAGGACTGA????AGTACAACAT ???ACTGCGAGAA

551	?GATGTTGTTT ???TATACATGGA????CCCAATGTGC????CTGGATGCGT????TCCCAAAATT
	?CTACAACAAA????ATATGTACCT????GGGTTACACG????GACCTACGCA????AGGGTTTTAA

601	?AGTTTGTTTT????AAAAAACGTA????TTGAAGCTAT????CCCACAAATT????GATAAGTACT
	?TCAAACAAAA????TTTTTTGCAT????AACTTCGATA????GGGTGTTTAA????CTATTCATGA

651	?TGAAATCCAG????CAAGTATATA????GCATGGCCTT????TGCAGGGCTG????GCAAGCCACG
	?ACTTTAGGTC????GTTCATATAT????CGTACCGGAA????ACGTCCCGAC????CGTTCGGTGC
	PreScission
	↓
701	?TTTGGTGGTG????GCGACCATCC????TCCAAAACTG????GAAGTTCTGT????TCCAGGGGCC
	?AAACCACCAC????CGCTGGTAGG????AGGTTTTGAC????CTTCAAGACA????AGGTCCCCGG
	NotI
	BamHIEcoRISacIAscIPstISalIHindIII
751	?CGGATCCGAA????TTCGAGCTCG????GCGCGCCTGC????AGGTCGACAA????GCTTGCGGCC
	?GCCTAGGCTT????AAGCTCGAGC????CGCGCGGACG????TCCAGCTGTT????CGAACGCCGG

801	?GCTAATGCTT????AAGTCGAACA????GAAAGTAATC????GTATTGTACA????CGGCCGCATA
	?CGATTACGAA????TTCAGCTTGT????CTTTCATTAG????CATAACATGT????GCCGGCGTAT
	T7transcription-2 →
	T7promoter2 Lacoperator
851	?ATCGAAATTA????ATACGACTCA????CTATAGGGGA????ATTGTGAGCG????GATAACAATT
	?TAGCTTTAAT????TATGCTGAGT????GATATCCCCT????TAACACTCGC????CTATTGTTAA
	rbsNdeIBglII
901	?CCCCATCTTA????GTATATTAGT????TAAGTATAAG????AAGGAGATAT????ACATATGGCA
	?GGGGTAGAAT????CATATAATCA????ATTCATATTC????TTCCTCTATA????TGTATACCGT
	MunIEcoRVFseIAatIIKpnIXhoI
951	?GATCTCAATT????GGATATCGGC????CGGCCACGCG????ATCGCTGACG????TCGGTACCCT
	?CTAGAGTTAA????CCTATAGCCG????GCCGGTGCGC????TAGCGACTGC????AGCCATGGGA

??????pET-Dual-N-GST-PreScission中沒(méi)有的酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that do not cut pET-Dual-N-GST-PreScission)包括：

AgeI	AleI	BbvCI	BmgBI	BmtI	BseRI	BsiWI
BsmI	Bsu36I	CspCI	NheI	NruI	NsiI	PmeI
PmlI	PspAI	RsrII	SacII	SexAI	SfiI	SmaI
SnaBI	SpeI	SrfI	StuI	TspMI	XmaI

??????pET-Dual-N-GST-PreScission中的單酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that cut pET-Dual-N-GST-PreScission once)包括：

XbaI	T`CTAG,A	30	PspXI	VC`TCGA,GB	999
NcoI	C`CATG,G	69	AvaI	C`YCGR,G	999
MscI	TGG\|CCA	281	BsoBI	C`YCGR,G	999
BstBI	TT`CG,AA	471	PaeR7I	C`TCGA,G	999
SwaI	ATTT\|AAAT	501	XhoI	C`TCGA,G	999
BamHI	G`GATC,C	752	PacI	TTA,AT`TAA	1072
EcoRI	G`AATT,C	758	AvrII	C`CTAG,G	1078
Eco53kI	GAG\|CTC	766	BlpI	GC`TNA,GC	1096
SacI	G,AGCT`C	764	DraIII	CAC,NNN`GTG	1421
BfuAI	ACCTGCNNNN`NNNN,	770	PsiI	TTA\|TAA	1549
BspMI	ACCTGCNNNN`NNNN,	770	SspI	AAT\|ATT	1629
AscI	GG`CGCG,CC	771	AhdI	GACNN,N`NNGTC	1833
PstI	C,TGCA`G	777	BsaI	GGTCTCN`NNNN,	1895
SbfI	CC,TGCA`GG	777	BglI	GCCN,NNN`NGGC	1951
SalI	G`TCGA,C	783	FspI	TGC\|GCA	2056
HindIII	A`AGCT,T	789	AlwNI	CAG,NNN`CTG	3027
NotI	GC`GGCC,GC	796	BstZ17I	GTA\|TAC	3672
AflII	C`TTAA,G	808	Tth111I	GACN`N,NGTC	3697
BsrGI	T`GTAC,A	835	PflFI	GACN`N,NGTC	3697
NdeI	CA`TA,TG	943	Bpu10I	CC`TNA,GC	4334
BglII	A`GATC,T	950	PpuMI	RG`GWC,CY	4434
MfeI	C`AATT,G	956	HpaI	GTT\|AAC	4801
EcoRV	GAT\|ATC	964	BstEII	G`GTNAC,C	5121
FseI	GG,CCGG`CC	969	MluI	A`CGCG,T	5303
AsiSI	GCG,AT`CGC	980	BstAPI	GCAN,NNN`NTGC	5624
ZraI	GAC\|GTC	989	SphI	G,CATG`C	5832
AatII	G,ACGT`C	987	SgrAI	CR`CCGG,YG	5984
Acc65I	G`GTAC,C	993	ClaI	AT`CG,AT	6028
KpnI	G,GTAC`C	993	BspDI	AT`CG,AT	6028

??????pET-Dual-N-GST-PreScission質(zhì)粒中推薦使用的測(cè)序引物序列如下：
??????MCS1-N Primer (626-647): 5′-GCTATCCCACAAATTGATAAGT-3′
??????MCS1-C Primer (853-834): 5′-GATTATGCGGCCGTGTACAA-3′
??????MCS2-N Primer (834-853): 5′-TTGTACACGGCCGCATAATC-3′
??????T7 terminator Primer (1093-1111): 5′-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′
??????pET-Dual-N-GST-PreScission的全序列信息：D2933 pET-Dual-N-GST-PreScission.txt。
??????不同原核表達(dá)質(zhì)粒的比較和選擇，以及標(biāo)簽、蛋白酶切位點(diǎn)和蛋白共表達(dá)的考慮可以參考如下網(wǎng)頁(yè)：
??????http://www.beyotime.com/support/prokaryotic-plasmids.htm?
包裝清單：

產(chǎn)品編號(hào)	產(chǎn)品名稱	包裝
D2933-1μg	pET-Dual-N-GST-PreScission	1μg
D2933-100μg	pET-Dual-N-GST-PreScission	100μg
—	說(shuō)明書	1份

保存條件：
??????-20℃保存。
注意事項(xiàng)：
??????本質(zhì)粒未經(jīng)碧云天書面許可不得用于任何商業(yè)用途，也不得移交給訂貨人所在實(shí)驗(yàn)室外的任何個(gè)人或單位。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

關(guān)鍵字： pET-Dual-N-GST-PreScission

公司簡(jiǎn)介

碧云天由美國(guó)哈佛大學(xué)的留學(xué)人員創(chuàng)辦于2001年，為上海市高新技術(shù)企業(yè)，公司核心團(tuán)隊(duì)由來(lái)自美國(guó)哈佛大學(xué)、NIH、UCLA、香港大學(xué)、南京大學(xué)、中國(guó)科技大學(xué)、中國(guó)科學(xué)院等著名大學(xué)和科研機(jī)構(gòu)的高水平科研人員及默克、諾華等頂尖醫(yī)藥企業(yè)的管理人員組成。十多年來(lái)，碧云天已經(jīng)成為世界一流的生物、醫(yī)學(xué)研究用試劑、試劑盒和消耗品的研發(fā)和生產(chǎn)企業(yè)，同時(shí)提供生命科學(xué)研究的技術(shù)服務(wù)和一站式實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備采購(gòu)平臺(tái)。目前已有近50000篇注明使用碧云天產(chǎn)品的研究論文發(fā)表在包括Nature、Cell等國(guó)際高水平學(xué)術(shù)期刊，日均逾33.37篇！碧云天將繼續(xù)致力于科研用技術(shù)和產(chǎn)品的研發(fā)，用我們最頂尖的技術(shù)、最成熟的產(chǎn)品、最熱情的服務(wù)，服務(wù)科研人員，造福生命健康

成立日期	2007-07-19 （18年）	注冊(cè)資本	1000.000000萬(wàn)人民幣
員工人數(shù)	500人以上	年?duì)I業(yè)額	￥ 500萬(wàn)-1000萬(wàn)
主營(yíng)行業(yè)	生化試劑,核苷，核苷酸，寡核苷酸,抗體,蛋白組學(xué),生物活性小分子	經(jīng)營(yíng)模式	試劑

碧云天生物技術(shù)有限公司

非會(huì)員

公司成立：18年
注冊(cè)資本：1000.000000萬(wàn)人民幣
企業(yè)類型：有限責(zé)任公司(自然人投資或控股)
主營(yíng)產(chǎn)品：生物領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)研發(fā)、技術(shù)服務(wù)、技術(shù)轉(zhuǎn)讓。化學(xué)試劑（除危險(xiǎn)品），實(shí)驗(yàn)室消耗品，實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備的生產(chǎn)和銷售，從事貨物及技術(shù)的進(jìn)出口業(yè)務(wù)。
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