"C-33 A細(xì)胞：人子宮頸癌細(xì)胞

細(xì)胞物種來(lái)源：人源或鼠源等其它物種來(lái)源

C-33 A Cell

細(xì)胞形態(tài)特性：上皮細(xì)胞樣

19367-38-5

【懸浮型細(xì)胞的傳代操作】1)吸出細(xì)胞培養(yǎng)液，放入離心管中，離心1000rpm 5分鐘；2)吸掉上清液，加入適量之新鮮培養(yǎng)基，混和均勻后，依稀釋比例轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中，以正常培養(yǎng)條件培養(yǎng)?！咀⒁馐马?xiàng)】1)嚴(yán)格的無(wú)菌操作；2)適度消化：消化的時(shí)間受消化液的種類、配制時(shí)間、加入培養(yǎng)瓶中的量等諸多因素的影響，消化過(guò)程中應(yīng)該注意培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)的變化，一旦胞質(zhì)回縮，連接變松散，或有成片浮起的跡象就要立即終止消化。附：EDTA(0.02％四乙酸二鈉)消化液配方：EDTA 0.20g，NaCl 8.00g，KCl 0.20g，KH2PO4 0.02g，葡萄糖 2.00g，0.5％紅4ml，加入蒸餾水定容至1000ml。10磅20min高壓滅菌，使用時(shí)調(diào)節(jié)PH值到7.4。注意EDTA不能被血清中和，使用后培養(yǎng)瓶要徹底清洗，否則再培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞容易脫壁。

C-33 A細(xì)胞：人子宮頸癌細(xì)胞

細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

OSC-19細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁；細(xì)胞背景資料：舌鱗癌；男性

RS1細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2傳代；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)??；細(xì)胞背景資料：該細(xì)胞系來(lái)源于一大鼠的皮膚組織。2007年由中國(guó)科學(xué)院昆明細(xì)胞庫(kù)建立。

P3/ag細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：懸??；細(xì)胞背景資料：骨髓瘤

NCI-H1693細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代,每周換液2次；細(xì)胞形態(tài)特性：上皮細(xì)胞；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)；細(xì)胞背景資料：詳見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)介紹

SNU-182細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2傳代；細(xì)胞形態(tài)特性：上皮樣；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)；細(xì)胞背景資料：詳見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)介紹

【細(xì)胞培養(yǎng)中細(xì)菌、霉菌的污染情況總結(jié)】細(xì)菌：細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀，根據(jù)感染細(xì)菌的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁變黃，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)影響明顯。仔細(xì)檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時(shí)放氣時(shí)間足夠，壓力足夠！尤其是和儲(chǔ)存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品，連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲(chǔ)存液污染，一定要注意！下次使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現(xiàn)象！可在培養(yǎng)液中加相應(yīng)的抗生素處理；霉菌：培養(yǎng)液是清亮的，倒置顯微鏡下無(wú)雜質(zhì)，37度孵箱培養(yǎng)2-3天，仍清亮，但出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)，鏡下可見(jiàn)呈細(xì)絲狀的團(tuán)狀漂浮物，可看到明顯的菌絲，細(xì)胞仍可生長(zhǎng)，但時(shí)間長(zhǎng)之后，細(xì)胞的活力狀態(tài)變差，用酸銅溶液擦拭CO2孵箱內(nèi)，再把水盤里也加上飽和量的酸銅?；蛘咴谂囵B(yǎng)箱的托盤加入飽和的消毒二鈉高鹽液體,可以防止霉菌污染。CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有細(xì)胞暫時(shí)轉(zhuǎn)移，采用擦洗孵箱(包括隔板，箱壁)。并把放置在孵箱內(nèi)一個(gè)小時(shí)，使其蒸汽彌漫。待的氣味消散后，再移入細(xì)胞。孵箱應(yīng)定期清潔(2月左右)，尤其在多雨的季節(jié)。其它培養(yǎng)箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外燈照。預(yù)防霉菌污染，可在培養(yǎng)基里加3u/ml的兩性霉素或制霉菌素或D或雙抗；但細(xì)胞一旦污染，很難挽救，制霉菌素或D或雙抗都于事無(wú)補(bǔ)，建議舍棄該污染細(xì)胞，將環(huán)境徹底消毒，如果所有細(xì)胞都污染，可能是系統(tǒng)污染，檢查一下培養(yǎng)基和器材，如果只是個(gè)別污染，可能是操作問(wèn)題，就要注意操作。

B104細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁；細(xì)胞背景資料：神經(jīng)母細(xì)胞瘤；BDIX

TG HAVSMC細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁或懸浮，詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)部分；細(xì)胞背景資料：詳見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)介紹

Duckembryo細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2傳代；細(xì)胞形態(tài)特性：成纖維母細(xì)胞樣；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)；細(xì)胞背景資料：詳見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)介紹

D341Med細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：懸??；細(xì)胞背景資料：成神經(jīng)管細(xì)胞瘤；男性

COLO-201細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：半貼壁；細(xì)胞背景資料：結(jié)腸腺癌；腹水轉(zhuǎn)移；男性

143BTK-細(xì)胞系；細(xì)胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次；細(xì)胞形態(tài)特性：詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)；細(xì)胞生長(zhǎng)特性：貼壁或懸浮，詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)部分；細(xì)胞背景資料：詳見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)介紹

C-33 A細(xì)胞：人子宮頸癌細(xì)胞

細(xì)胞產(chǎn)品包裝：復(fù)蘇形式：T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：1ml凍存管(兩支)

細(xì)胞來(lái)源說(shuō)明：細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)外著名大學(xué)建系

細(xì)胞培養(yǎng)方面注意的幾點(diǎn)：無(wú)菌意識(shí)要強(qiáng)：實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，超凈臺(tái)以紫外燈照射30分鐘滅菌，以70%ethanol擦拭無(wú)菌操作抬面，并開(kāi)啟超凈工作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)數(shù)分鐘后，才開(kāi)始實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只處理一株細(xì)胞株，以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。實(shí)驗(yàn)完畢后，將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺(tái)，以70%ethanol擦拭無(wú)菌操作抬面。無(wú)菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暫時(shí)放置，其它個(gè)人實(shí)驗(yàn)用品用完應(yīng)立即拿出。實(shí)驗(yàn)用品以70%乙醇擦拭后才帶入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在中央無(wú)菌區(qū)域，一般勿在邊緣區(qū)域操作。小心取用無(wú)菌之實(shí)驗(yàn)物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開(kāi)之容器正上方操作實(shí)驗(yàn)。容器打開(kāi)后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約45°角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。選擇正確的培養(yǎng)基：不同的細(xì)胞可能培養(yǎng)基不同，甚至不同的文獻(xiàn)可能對(duì)相同的細(xì)胞培養(yǎng)基成分也是可能不同的。如我當(dāng)時(shí)培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞，有文獻(xiàn)就選用neurobase培養(yǎng)基，而我的實(shí)驗(yàn)?zāi)康闹饕亲隹寡趸脱趸矫娴模@種培養(yǎng)基中含有抗氧化劑成分，此時(shí)，我就不得不選擇另外一種不含抗氧化劑的培養(yǎng)基。瓶裝血清一定要逐步解凍:4℃冰箱全溶后再分裝，在溶解過(guò)程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。勿直接由–20℃直接至37℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。熱滅活是指56℃，30分鐘加熱已完全解凍之血清。水浴鍋升到56℃后，將血清放入，待溫度升高到56℃后計(jì)時(shí)，一般5分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補(bǔ)體成份去活化。除非必須，一般不要作此熱處理，因?yàn)闀?huì)造成沉淀物之顯著增多，且會(huì)影響血清之品質(zhì)。注意更換新血清(包括不同批次)對(duì)細(xì)胞的影響。

細(xì)胞背景資料：C-33A細(xì)胞株是N. Auersperg從宮頸癌切片中建立的一系列細(xì)胞株(參見(jiàn)ATCC CRL-1594和ATCC CRL-1595)中的一株。 細(xì)胞一開(kāi)始就表現(xiàn)出亞二倍體核型及上皮細(xì)胞形態(tài)。 連續(xù)傳代可以觀察到核型不穩(wěn)定。 存在成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤蛋白(pRB)，但大小不正常。 P53表達(dá)上調(diào)，且有一個(gè)273位密碼子的點(diǎn)突變導(dǎo)致Arg -> Cys的替換。 人乳頭瘤病毒DNA及RNA陰性。

C-33 A細(xì)胞：人子宮頸癌細(xì)胞

細(xì)胞傳代方法：1：2傳代

傳代細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)：1)掌握好細(xì)胞消化的時(shí)間，消化時(shí)間過(guò)短時(shí)，細(xì)胞不宜從瓶壁脫落，過(guò)長(zhǎng)的消化會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞脫落、損傷；2)掌握好消化濃度，當(dāng)消化液濃度過(guò)高時(shí)，消化時(shí)間應(yīng)縮短，過(guò)低時(shí)細(xì)胞消化時(shí)間相對(duì)延長(zhǎng)。體內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)及其操作步驟：瘤細(xì)胞懸液接種1)無(wú)菌選取生長(zhǎng)良好(有光澤，淡紅色)瘤組織或?qū)?shù)生長(zhǎng)期培養(yǎng)瘤細(xì)胞；2)在PBS中將瘤組織剪碎后用勻漿器研磨，經(jīng)80～100目篩網(wǎng)過(guò)濾成細(xì)胞懸液；3)培養(yǎng)細(xì)胞應(yīng)用PBS洗兩遍；4)計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度至10(7)～10(8)/ml；5)常規(guī)消毒后，于接種部位(通常為背部或腋窩腹股溝皮下)用醫(yī)用注射器皮下潛行一段后注入細(xì)胞懸液(0.1ml/部位，＞10(6)細(xì)胞)。初次接種成功率低，細(xì)胞數(shù)盡可能多一些；6)次日注意觀察動(dòng)物一般情況。初次接種一般有一段較長(zhǎng)的潛伏期，以后隨著傳代潛伏期逐漸縮短，最后固定為一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的時(shí)間。腹水瘤的建立與腹水瘤的接種：將實(shí)體瘤細(xì)胞直接種于小鼠腹腔、腹壁或其他部位，引起腹水，腹水中含有瘤細(xì)胞，將這種腹水反復(fù)傳代，即可成為腹水瘤。初次傳代時(shí)，腹水常呈血性(含大量紅細(xì)胞)，反復(fù)傳代后腹水逐漸變成乳白色。腹水瘤的接種過(guò)程如下：1)將凍存或培養(yǎng)的腹水瘤細(xì)胞離心和洗滌，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)；2)消毒動(dòng)物，左下腹穿刺接種1×10(6)腹水瘤細(xì)胞；3)接種腹水瘤細(xì)胞后約7-12d，待小鼠腹部明顯膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部，用9號(hào)針頭抽取腹水，也可行腹部解剖后，用滴管吸取。每只小鼠可抽3-5ml；4)抽取的腹水經(jīng)3000rpm離心15min，收集上清，分裝凍存?zhèn)溆谩?/div>