產品描述
Hieff NGS® UltimaTM DNA Ligation Module是針對Illumina®高通量測序平臺文庫構建專業(yè)設計的DNA連接模塊，其中的亮點為本產品采用一款我公司自主研發(fā)的高效連接酶Fast T4 DNA ligase。本產品可在雙鏈平末端DNA片段或雙鏈3´-dA DNA片段的兩端連接Illumina®測序平臺適用的DNA接頭，具有連接效率高、簡便、可實現自動化等優(yōu)勢。本產品已與Hieff NGS® UltimaTM Endperp Mix（Cat#12605），2×Super Canace® II High-Fidelity Mix for Library Amplification（Cat#12621）共同用于DNA文庫構建，通過Illumina®高通量平臺測序驗證其有效性。本產品中提供的所有試劑組分，都經過嚴格的質量與功能驗證，最高程度保障產品優(yōu)異性能與批間穩(wěn)定性。
質量控制
Fast T4 DNA Ligase
1. SDS-PAGE純度：>95%。
2. 16小時孵育檢測：50 μL反應體系中包含5μl本酶和1 μg HindIII-λDNA，37°C下孵育16小時。經瓊脂糖凝膠電泳檢測，條帶無降解；50 μL反應體系中包含5μl本酶和1 μg T3 DNA，37°C下孵育16小時。經瓊脂糖凝膠電泳檢測，條帶無降解。
3. RNase活性：5 μl本酶中加入40 ng FAM-RNA及，37°C下孵育16小時。經聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測，條帶無降解。
4. 核酸內切酶活性：50 μL反應體系中加入5 μl本酶和1 μg φX174 RF I DNA，37°C下孵育4小時。經瓊脂糖凝膠電泳檢測，RF II轉化比率<10%。
5. 核酸外切酶活性：50 μL反應體系中加入至少5 μl本酶和1 μg聲振的[3H]DNA（105 cpm/μg），37°C下孵育4小時，釋放的放射性<0.1%。
6. 功能活性（平末端連接）：50 μL反應體系，在1×Fast Ligation Buffer中，加入0.5 µL Fast T4 DNA Ligase，18 μgHaeIII φX174，16°C孵育7.5分鐘。經瓊脂糖電泳檢測，片段連接率>95%。
7. 功能活性（接頭連接）：50 μL反應體系，在1×Fast Ligation Buffer中，加入0.125 µL Fast T4 DNA Ligase，8 nmol12 bp接頭，16°C孵育過夜。經瓊脂糖電泳檢測，無明顯未連接接頭。
Fast Ligation Buffer
1. 16小時孵育檢測：50 μL反應體系中包含1×Fast Ligation Buffer和1 μg HindIII-λDNA，37°C下孵育16小時。經瓊脂糖凝膠電泳檢測，條帶無降解；50 μL反應體系中包含1×Fast Ligation Buffer和1 μg T3 DNA，37°C下孵育16小時。經瓊脂糖凝膠電泳檢測，條帶無降解。
2. 核酸內切酶活性：50 μL反應體系中包含1×Fast Ligation Buffer和1 μg φX174 RF I DNA，37°C下孵育4小時。經瓊脂糖凝膠電泳檢測，RF II轉化比率<10%。
3. RNase活性：在1×Fast Ligation Buffer中加入40 ng FAM-RNA，37°C下孵育16小時。經聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測，條帶無降解。
4. 磷酸酶活性檢測：在磷酸酶活性檢測緩沖液中加入1×Fast Ligation Buffer和2.5 mM對硝基苯磷酸，37°C下孵育4小時。經光譜測定法檢測，405 nm處無對硝基苯陰離子特征吸收峰。
關鍵字： 快速DNA連接模塊_DNA連接_磁珠_
上海翊圣生物科技有限公司（Yeasen Biotech Co., Ltd.）成立于2009年，是專注于酶制劑和抗原抗體開發(fā)的高新技術型企業(yè)，致力于為生命科學研究領域內的科研客戶及精準醫(yī)療相關行業(yè)的工業(yè)客戶提供高質量的產品和優(yōu)質的服務。
公司現階段建設有分子、蛋白、細胞和免疫四大技術平臺，涵蓋全面豐富的產品線，包括PCR、qPCR、高保真DNA聚合酶、逆轉錄相關制劑、克隆試劑盒、高通量測序MaxUP系列DNA和RNA建庫試劑盒、細胞培養(yǎng)、支原體檢測/預防/去除試劑，以及體外診斷相關的酶原料、試劑和磁珠等3000多種試劑和試劑盒，服務于全國各級高校、研究所、醫(yī)院、第三方檢測機構、生物醫(yī)藥公司等2.5萬家客戶，助力發(fā)表高質量SCI論文1000余篇。
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