產(chǎn)品描述
 

Taq DNA Ligase是一種耐高溫連接酶，它能催化與同一互補(bǔ)靶DNA鏈雜交的兩條相鄰寡核苷酸鏈的5´-磷酸和3´-羥基之間形成磷酸二酯鍵。該催化反應(yīng)只有當(dāng)兩條寡核苷酸鏈與互補(bǔ)靶 DNA 完全配對(duì)，且兩條寡核苷酸鏈之間沒有間隙的條件下才會(huì)發(fā)生。因此，可以用它來檢測單堿基替換。Taq DNA連接酶以NAD⁺為輔酶因子，在45℃-65℃范圍內(nèi)均有活性。

產(chǎn)品組分
 

來源

重組E. coli 菌株，含有從Thermus aquaticus HB8中克隆的連接酶基因。

產(chǎn)品應(yīng)用
 

1）用連接酶檢測反應(yīng)和連接酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)對(duì)等位基因進(jìn)行特異性檢測；

2）通過PCR擴(kuò)增摻入磷酸化寡核苷酸進(jìn)行誘變；

3）同源重組。

單位定義

在50 μL 反應(yīng)體系中，45℃條件下，孵育15 min能使50%的1 μg經(jīng)BstEII消化的λDNA片段（12 bp粘性末端）發(fā)生連接所需要的酶量定義為1個(gè)活性單位(U)。

質(zhì)量控制

核酸內(nèi)切酶活性：在50 μL反應(yīng)體系中，10 μL酶溶液與0.5 μg pENZuC DNA作用，37℃孵育4 h，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳，無肉眼可見的環(huán)狀切口DNA出現(xiàn)。

核酸外切酶活性：在50 μL反應(yīng)體系中，10 μL酶溶液和10000 cpm/μg放射性標(biāo)記的DNA作用，37℃孵育4 h，溶液中可溶性TCA的釋放量小于5.0%。

運(yùn)輸和保存方法
 

冰袋運(yùn)輸。-20℃保存。長時(shí)間（大于30天）保存時(shí)，緩沖液應(yīng)于-80℃保存。