Terminal Deoxynucleotidyl Transferase(末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶,TdT)是一種模板非依賴型DNA聚合酶,催化脫氧核苷酸重復(fù)添加到寡核苷酸、單鏈和雙鏈DNA的3'羥基端。TdT反應(yīng)需要含有至少3個(gè)堿基的短序列作為引物。以RNA為模板時(shí),TdT性能嚴(yán)格依賴于受體RNA 3’-末端的三級(jí)結(jié)構(gòu)和核苷酸的種類。一般TdT對(duì)RNA模板的作用效率比DNA模板低。
應(yīng)用
合成同聚物和雜聚物;線性雙鏈DNA的3’-OH末端同聚物加尾;寡聚脫氧核苷酸和DNA標(biāo)記;5’-RACE(快速擴(kuò)增cDNA末端);凋亡反應(yīng)的原位定位。
來源
大腸桿菌細(xì)胞,含有編碼牛胸腺末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶的基因。
單位定義
37℃,60 min內(nèi)將1 nmol脫氧核糖核苷酸摻入多聚核苷酸片段所需的酶量定義為1個(gè)活性單位(U)。
質(zhì)量控制
相關(guān)測(cè)試表明無內(nèi)切和外切脫氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染。
抑制與失活
抑制劑:金屬螯合劑、銨、氯化物、碘化物和磷酸鹽離子。
失活:加入EDTA,70℃加熱10 min。
上海翊圣生物科技有限公司
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