化學(xué)名

1-[4-(4-propanoylpiperazin-1-yl)-3-(trifluoromethyl)phenyl]-9-quinolin-3-ylbenzo[h][1,6]naphthyridin-2-one

簡(jiǎn)稱

Torin 1

別名

Torin 1 cpd, Torin1, Torin-1

中文名

N/A

化學(xué)式

C₃₅H₂₈F₃N₅O₂

分子量

607.62

CAS號(hào)

1222998-36-8

純度

99.0%

溶劑/溶解度

Water <1mg/ml; DMSO 20mg/ml warmed; Ethanol <1mg/ml

溶液配制

5mg加入0.82ml DMSO，或者每6.08mg加入1ml DMSO，配制成10mM溶液。SC0245-10mM用DMSO配制。

產(chǎn)品描述

Torin 1是一種有效的mTORC1/2抑制劑，在無(wú)細(xì)胞試驗(yàn)中IC50為2nM/10nM；作用于mTOR比作用于PI3K選擇性高1000倍。

信號(hào)通路

PI3K/Akt/mTOR

靶點(diǎn)

mTORC1

mTOR

DNA-PK

mTORC2

p110γ

IC50

2nM

4.32nM

6.34nM

10nM

171nM

體外研究

Torin 1在2和10nM濃度下分別抑制mTORC1和mTORC2底物的磷酸化。此外，Torin 1對(duì)mTOR比對(duì)PI3K(EC50=1800nM)的選擇性高1000倍，比對(duì)450種其它蛋白激酶的結(jié)合選擇性高100倍。Torin 1通過(guò)耐rapamycin機(jī)制引起細(xì)胞周期阻滯，并且其不依賴于mTORC2。Torin 1比rapamycin更完全地干擾mTORC1依賴表現(xiàn)型。Cap依賴性翻譯需要mTORC1耐Rapamycin的功能。在近期的一項(xiàng)研究中，據(jù)報(bào)道Torin 1通過(guò)活化人內(nèi)分泌細(xì)胞系BON中MEK/ERK/c-Jun通路，能夠增加神經(jīng)降壓素分泌和基因表達(dá)。

體內(nèi)研究

Torin 1在20mg/kg劑量下，在U87MG異種移植模型中是有效的，并且在腫瘤和外周組織中對(duì)mTOR下游效應(yīng)蛋白表現(xiàn)出良好的藥效學(xué)抑制作用。

臨床實(shí)驗(yàn)

N/A

特征

N/A

酶活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

方法

為產(chǎn)生可溶性mTORC1，HEK-293T細(xì)胞系，穩(wěn)定表達(dá)N端FLAG標(biāo)記的Raptor，使用水泡性口炎病毒G-假型病毒MSCV逆轉(zhuǎn)錄酶病毒產(chǎn)生。對(duì)于mTORC2，產(chǎn)生相似的HeLa細(xì)胞，能夠穩(wěn)定表達(dá)N端FLAG-標(biāo)記的Protor-1。兩個(gè)復(fù)合物通過(guò)在50mM HEPES(pH7.4)、10mM焦磷酸鈉、10mM β-甘油磷酸鈉、100mM NaCl、2mM EDTA、0.3% CHAPS中裂解細(xì)胞純化。細(xì)胞在4℃下裂解30分鐘，不溶解部分通過(guò)以13,000rpm微量離心10分鐘移除。上清液與FLAG-M2單克隆抗體-瓊脂糖培育1小時(shí)，然后用裂解緩沖液洗滌3次，用包含終濃度0.5M NaCl的裂解緩沖液洗滌1次。純化的mTORC1用100μg/ml 3×FLAG多肽在50mM HEPES(pH7.4)、100mM NaCl中洗脫。將洗出液等分收集，儲(chǔ)存在-80℃。純化底物S6K1和Akt1。激酶試驗(yàn)在30℃，由激酶緩沖液(25mM HEPES(pH7.4)、50mM KCl、10mM MgCl2、500μM ATP)和150ng滅活的S6K1或Akt1底物組成的20μl終體積混合物中進(jìn)行。反應(yīng)通過(guò)加入80μl樣品緩沖液停止，并沸煮5分鐘。隨后，樣品通過(guò)SDS-PAGE和免疫印跡法分析。

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞系

MEFs

濃度

~250nM

處理時(shí)間

4天

方法

細(xì)胞活性通過(guò)CellTiter-Glo發(fā)光法細(xì)胞活性測(cè)定評(píng)估。在第0天，細(xì)胞以500細(xì)胞每孔接種到96孔板，并生長(zhǎng)過(guò)夜。第1天，細(xì)胞用適當(dāng)?shù)幕衔锾幚?，隨后在第3-5天分析。對(duì)于分析，板在室溫下培育60分鐘，將50μl CellTiter-Glo試劑加入每孔中，板在定軌搖床上混合12分鐘。發(fā)光在標(biāo)準(zhǔn)平板光度計(jì)上定量。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

動(dòng)物模型

U87MG異種移植物模型

配制

Torin 1粉末首先以25mg/ml在100% N-甲基-2-吡咯烷酮中溶解，隨后以1:4與無(wú)菌50% PEG400稀釋到5mg/ml的終濃度

劑量

20mg/kg

給藥方式

腹腔注射給藥，每天一次

產(chǎn)品編號(hào)

產(chǎn)品名稱

包裝

SC0245-10mM

Torin 1 (mTOR抑制劑)

10mM×0.2ml

SC0245-5mg

Torin 1 (mTOR抑制劑)

5mg

SC0245-25mg

Torin 1 (mTOR抑制劑)

25mg

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說(shuō)明書

1份