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高純質(zhì)粒小提試劑盒
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高純質(zhì)粒小提試劑盒

價格 詢價
包裝 100次
最小起訂量 100次
發(fā)貨地 北京
更新日期 2024-12-08

產(chǎn)品詳情

中文名稱:高純質(zhì)粒小提試劑盒產(chǎn)品類別: 基因提取
2024-12-08 高純質(zhì)粒小提試劑盒 100次/RMB 基因提取

高純質(zhì)粒小提試劑盒目錄號:RTP2101)

 

貨號

規(guī)格

價格

RTP2101-02

100次

300元

RTP2101-03

200次

460元

 

 

試劑盒內(nèi)容及保存:

試劑盒組成

RTP2101-02

100次)

RTP2101-03

200次)

貯存方式

RNase A

300 μl

600 μl

-20℃

Lysis Dye

600μl

2×600μl

室溫

溶液P1

30 ml

60 ml

室溫

(加入RNase A后2-8℃保存)

溶液P2

30 ml

60 ml

室溫

溶液P3

40 ml

80 ml

室溫

去蛋白液PD

60 ml

120 ml

室溫

漂洗液PW

25 ml

2×25 ml

室溫

洗脫緩沖液EB

15 ml

15 ml

室溫

質(zhì)粒吸附柱CP

100個

2×100個

室溫

收集管(2 ml)

100個

2×100個

室溫

說明書

1份

1份

 

 

 

儲存條件和效期:

本試劑盒在室溫(25℃左右)干燥條件下,可保存1年;更長時間的保存可置于2–8℃。2–8℃保存條件下,若溶液產(chǎn)生沉淀,應在使用前置于37℃下溶解沉淀至溶液澄清后再使用。單獨包裝的RNase A 在-20℃可穩(wěn)定保存1年以上。加入RNase A后的溶液P1應置于2–8℃保存,可穩(wěn)定保存半年。

 

產(chǎn)品簡介及使用說明:

本試劑盒采用經(jīng)典的堿裂解法裂解細菌,再通過離心吸附柱在高鹽狀態(tài)下特異性地結(jié)合DNA的特性,可以從1–5ml大腸桿菌LB培養(yǎng)液中快速提取3–20μg純凈的高拷貝質(zhì)粒DNA。提取的質(zhì)粒可適用于各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR、測序、連接和轉(zhuǎn)化等實驗。然而,對質(zhì)粒純度要求更高的轉(zhuǎn)染實驗(要求無內(nèi)毒素),此試劑盒不能達到要求。另外,盡管該試劑盒可以抽提較大的質(zhì)粒(>10kb),但我們不推薦使用。如果一定要使用,請參考以下方法:加大菌體使用量(使用5–10 ml過夜培養(yǎng)物),同時按照比例增加P1、P2、P3的用量;洗脫緩沖液應在70℃預熱,在吸附和洗脫時可以適當?shù)难娱L時間,以增加提取效率,其它步驟相同。

 

產(chǎn)品特點:

1使用了Lysis Dye,菌體裂解是否完全一目了然。由于判斷菌體裂解和中和是否徹底更主要取決于操作者的經(jīng)驗,所以我們增加了Lysis Dye(一種能使裂解/中和體系變換顏色的試劑)來幫助觀察裂解/中和的程度。加入P1后,Lysis Dye使菌液變?yōu)闇啙岬募t色;加入P2后,Lysis Dye立即使溶液變?yōu)槌吻宓募t色,裂解是否完全只要觀察紅色溶液是否澄清,如果紅色非常均一,表明裂解充分;在完全裂解的體系中加入P3混勻后,體系立即變?yōu)辄S色,任何紅色的殘留表明沒有完全混勻或者中和不徹底。

2 增加了去蛋白液PD,能更加徹底地去除蛋白污染,得到純度更高的質(zhì)粒。

準備工作:

1 將試劑盒附帶的RNase A全部加入到溶液P1中(如15ml P1中加入150μl RNase A),混勻后4℃貯存。

2 按照標簽所示在漂洗液PW中加入無水乙醇,混勻后蓋緊瓶蓋后室溫貯存?zhèn)溆谩?/p>

3 每次使用前請檢查溶液P2,溶液P3和去蛋白液PD是否有沉淀生成,如果出現(xiàn)沉淀,37℃溫浴至沉淀溶解后再使用。

 

使用Lysis Dye的標準操作步驟:

如非指出,所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

1.   取1–5 ml過夜培養(yǎng)的菌液加入離心管中,10,000g 離心1分鐘,盡量吸除上清。

:菌液較多時可以通過幾次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中。

2.   向菌體沉淀的離心管中加入250 μl溶液P1(請先檢查是否已加入RNaseA)和5μl Lysis Dye,使用移液器或渦旋振蕩器徹底懸浮細菌細胞沉淀,此時溶液為渾濁的紅色。

注:如果有未徹底混勻的菌塊,會影響裂解,導致提取量和純度偏低。

3.   加入250 μl溶液P2,溫和地上下翻轉(zhuǎn)6–8次使菌體充分裂解,此時溶液變?yōu)槌吻宓募t色。

:溫和地混合,不要劇烈震蕩,以免污染基因組DNA;所用時間絕對不應超過5分鐘 ,以免質(zhì)粒受到破壞;紅色溶液應該透明均一,如有渾濁紅色顆粒,表明裂解不充分,會大大降低質(zhì)粒提取效率。

4.   加入350 μl溶液P3,立即溫和地上下翻轉(zhuǎn),充分混勻,混勻充分的標志是溶液完全呈透明的黃色,如有可見紅色,說明混勻不徹底。10,000g 離心10分鐘。

注:P3加入后應立即混合,避免產(chǎn)生局部沉淀。

5.  小心地將上清轉(zhuǎn)移到吸附柱CP中(吸附柱放入收集管中),10,000g離心30–60秒,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱CP重新放回收集管中。

6.向吸附柱CP中加入500 μl去蛋白液PD,10,000g離心30秒,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱CP重新放回收集管中。

7.  向吸附柱CP中加入700 μl漂洗液PW(請先檢查是否已加入無水乙醇),10,000g 離心30–60秒,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱CP重新放回收集管中。

8. 向吸附柱CP中加入500 μl漂洗液PW,10,000g 離心30–60秒,倒掉收集管中的廢液。

9.  將吸附柱CP置于重新放回收集管中,10,000g 離心2分鐘。

:此步驟目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,絕對不可省略,因為漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)實驗(酶切,PCR等)。

10. 將吸附柱CP置于一個干凈的1.5ml離心管中,向吸附膜的中央部位懸空滴加50–100 μl洗脫緩沖液EB,室溫放置2分鐘,10,000g 離心2分鐘將質(zhì)粒溶液收集到離心管中,-20℃保存。

注:● 為了增加質(zhì)粒的回收效率,可將得到的洗脫液重新加入離心吸附柱中,再次離心收集。

● 洗脫緩沖液體積不應少于50 μl,體積過小影響回收效率。

● 洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液應保證其pH值在7.0-8.5范圍內(nèi),pH值低于7.0會降低

洗脫效率。

不使用Lysis Dye的標準操作步驟:

如非指出,所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

1.   取1–5 ml過夜培養(yǎng)的菌液加入離心管中,10,000 g離心1分鐘,盡量吸除上清。

:菌液較多時可以通過幾次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中。

2.   向菌體沉淀的離心管中加入250 μl溶液P1(請先檢查是否已加入RNaseA),使用移液器或渦旋振蕩器徹底懸浮細菌細胞沉淀。

注:如果有未徹底混勻的菌塊,會影響裂解,導致提取量和純度偏低。

3.  加入250 μl溶液P2,溫和地上下翻轉(zhuǎn)6–8次使菌體充分裂解。

注:溫和地混合,不要劇烈震蕩,以免污染基因組DNA;所用時間絕對不應超過5分鐘,以免質(zhì)粒受到破壞。

4.   加入350 μl溶液P3,立即溫和地上下翻轉(zhuǎn)6–8次,充分混勻,此時會出現(xiàn)白色絮狀沉淀。10,000g 離心10分鐘。

注:P3加入后應立即混合,避免產(chǎn)生局部沉淀。如果上清中還有微小白色沉淀,可再次離心后取上清。

5.  小心地將上清轉(zhuǎn)移到吸附柱CP中(吸附柱放入收集管中),10,000g 離心30–60秒,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱CP重新放回收集管中。

6.向吸附柱CP中加入500 μl去蛋白液PD,10,000g離心30秒,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱CP重新放回收集管中。

7.   向吸附柱CP中加入700 μl漂洗液PW(請先檢查是否已加入無水乙醇),10,000g 離心30–60秒,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱CP重新放回收集管中。

7      向吸附柱CP中加入500 μl漂洗液PW,10,000g 離心30–60秒,倒掉收集管中的廢液。

8.  將吸附柱CP置于收集管中,10,000g 離心2分鐘。

:此步驟目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,絕對不可省略,因為漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)實驗(酶切,PCR等)。

9.   將吸附柱CP置于一個干凈的1.5ml離心管中,向吸附膜的中央部位懸空滴加50–100 μl洗脫緩沖液EB,室溫放置2分鐘,10,000g離心2分鐘將質(zhì)粒溶液收集到離心管中,-20℃保存。

關(guān)鍵字: 高純質(zhì)粒小提試劑盒_質(zhì)粒小提_基因提取_

公司簡介

中科瑞泰(北京)生物科技有限公司成立于2006年,是一家致力于產(chǎn)品研發(fā)、試劑銷售、技術(shù)服務為一體的生物技術(shù)企業(yè)。公司秉承“以人為本,誠信至上”的服務理念,依靠客戶的大力支持和我們的不懈努力獲得了快速的發(fā)展。 公司組織結(jié)構(gòu)清晰,內(nèi)部管理科學,擁有一支配備合理的年輕化隊伍,充分保障了公司的研發(fā)能力和在競爭日益激烈的市場中占據(jù)一席之地。 我們深知一顆幼苗的萌發(fā)和成長不僅需要我們堅強的信念和持久的毅力,更離不開廣大用戶的呵護和培養(yǎng),是廣大客戶給了我們廣闊的成長和發(fā)展空間,使這顆幼苗得以抽枝展葉,繼而繁茂生長。在這里,請廣大客戶接受我們最為誠摯的謝意!我們也承諾將為你們提供最為優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和最為優(yōu)良的
成立日期 2006-07-31 (19年) 注冊資本 10.000000萬人民幣
員工人數(shù) 50-100人 年營業(yè)額 ¥ 300萬-500萬
主營行業(yè) 細胞培養(yǎng),蛋白組學,分子生物學,免疫安全,生物芯片 經(jīng)營模式 貿(mào)易,工廠,試劑,定制,服務
  • 中科瑞泰(北京)生物科技有限公司
非會員
  • 公司成立:19年
  • 注冊資本:10.000000萬人民幣
  • 企業(yè)類型:有限責任公司(自然人投資或控股)
  • 主營產(chǎn)品:技術(shù)服務、技術(shù)推廣;銷售儀器儀表、化工產(chǎn)品(不含危險化學品及一類易制毒化學品)、衛(wèi)生用品、文化用品、計算機、軟件及輔助設(shè)備。
  • 公司地址:北京市海淀區(qū)高里掌路1號院6號樓301-13
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