非編碼RNA是指不編碼蛋白質(zhì)的RNA,因其異常表達而與許多疾病發(fā)生密切相關(guān),在細菌、真菌、哺乳動物等許多生物體的生命活動中發(fā)揮著極廣泛的調(diào)控作用, 因此受到研究者的重視并成為熱點研究領(lǐng)域。
非編碼RNA目前主要研究包括長鏈非編碼RNA和微小RNA,長鏈非編碼
RNA(Long non-coding RNA, lncRNA)通過多種機制發(fā)揮其生物學(xué)功能, 這些機制包括基因印記、染色質(zhì)重塑、細胞周期調(diào)控、剪接調(diào)控、mRNA 降解和翻譯調(diào)控等。lncRNA 通過這些作用機制在不同水平進行基因表達調(diào)控;而微小RNA(microRNA,miRNA)是一種長度約21-23nt的非編碼RNA,成熟的miRNA主要作用是對基因轉(zhuǎn)錄后水平進行負向調(diào)節(jié),通過引起其靶mRNA的降解或翻譯過程的中斷而參與細胞增殖、凋亡、免疫、神經(jīng)內(nèi)分泌以及干細胞分化等眾多生命過程。總之,它們不再被認為是不能編碼蛋白質(zhì)的垃圾RNA,而研究非編碼RNA對了解基因調(diào)控、基因敲除、人類疾病防治及生物進化探索等都具有重要意義。
目前用于非編碼RNA研究的主要方法有轉(zhuǎn)錄組測序、Northern 印跡、實時熒光定量PCR技術(shù)、熒光原位雜交、RNA 干擾和 RNA 結(jié)合蛋白免疫沉淀等,而熒光定量PCR方法作為檢測非編碼RNA表達的金標(biāo)準(zhǔn),其應(yīng)用更是廣泛。
關(guān)于microRNA
1.microRNA發(fā)現(xiàn)
1993年Lee等在秀麗新小桿線蟲內(nèi)首次發(fā)現(xiàn)非編碼蛋白質(zhì)但能時序調(diào)控其胚胎后期發(fā)育基因表達的小分子RNA:lin-4。2000年Reinhart等在對線蟲的發(fā)育調(diào)控研究中發(fā)現(xiàn)第二種miRNA:Let-7,接著人們相繼在細菌、果蠅、線蟲、斑馬魚、動植物與人體內(nèi)發(fā)現(xiàn)大量的miRNA編碼基因,進一步研究證實MicroRNA主要通過調(diào)控其靶基因mRNA在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控蛋白表達,最新有報道m(xù)icroRNA也能在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控基因表達。
2.microRNA作用機制
在細胞核內(nèi),由DNA轉(zhuǎn)錄生成pri-pre-microRNA被Drosha酶切割pri-pre-miRNA成形成長度大約70-100堿基的、具發(fā)夾結(jié)構(gòu)的pre-microRNA。該前體RNA經(jīng)核輸出蛋白轉(zhuǎn)運到細胞質(zhì),經(jīng)Dicer酶切割形成成熟的miRNAs。成熟miRNA主要是以RISC(RNA-induced silencing complex)復(fù)合體形式結(jié)合于靶mRNA而發(fā)揮基因表達調(diào)控作用。
3.microRNA應(yīng)用與檢測
由于microRNA在眾多程序的調(diào)控,諸如生物發(fā)育、細胞增殖和凋亡以及近來被證明與腫瘤發(fā)生相關(guān)等領(lǐng)域發(fā)揮作用,因此其鑒定和定性研究成為迅速發(fā)展的一大研究領(lǐng)域;
4. microRNA檢測流程--高通量熒光定量PCR法
啟因生物利用熒光定量PCR的方法,建立了人/鼠microRNA檢測的數(shù)據(jù)庫,目前能提供500多種microRNA檢測;并且開發(fā)了microRNA檢測芯片,提供microRNA大規(guī)模篩選檢測技術(shù)服務(wù)。
關(guān)鍵字: MICRORNA_LNCRNA檢測_PCR_
公司擁有國內(nèi)唯一能夠同時進行384孔最低反應(yīng)體系1ul的高通量實時熒光定量PCR服務(wù)平臺,依托此平臺,提供各種PCR芯片的技術(shù)服務(wù)。
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