描述：MTT四唑藍是一種能接受氫原子的染料，可直接加入到細胞培養(yǎng)基中，被活細胞的線粒體琥珀酸脫氫酶還原為水不溶性的深紫色結晶狀產物formazan，但死細胞不能進行此還原反應。用特定溶劑可溶解MTT所產生的水不溶性紫色結晶，然后用酶標儀在570 nm波長附近(500~600 nm)處測定光吸收值，可反映活細胞的數(shù)量和代謝活力，并由此反映細胞的存活、增殖、生長、和毒性。例如加入細胞生長因子后，增殖生長旺盛的細胞將還原更多的MTT，并具有較高的光吸收度；反之，抗增殖抗腫瘤或細胞毒藥物處理后細胞生長越慢或毒性越大，則光吸收度越低。也用于檢測非藥物刺激如物理因素對細胞增殖和活力的影響。與3H-胸腺嘧啶摻入方法相比，簡便快速可靠，不使用放射性同位素，廣泛用于檢測細胞存活、增殖、生長、毒性實驗(1)。

組成與儲存： (500 assay)
1. MTT Stock: 5 ml，−20ºC 12個月
2. MTT 溶解劑: 50 ml, 室溫保存。

使用方法：
1. 使用與酶標儀匹配的96孔培養(yǎng)板。測定細胞增殖每孔加100微升2000個細胞，測定細胞毒性每孔加100微升5000個細胞。應根據所用的細胞類型、增殖速度進行調整。注意設置3個重復孔和無細胞培養(yǎng)基對照。37 ºC培養(yǎng)細胞至合適的時間，然后給予特定的藥物或物理因素刺激。
2. 藥物處理結束后，每孔每100 µl培養(yǎng)基加入10µl MTT Stock，37 ºC培養(yǎng)箱內繼續(xù)孵育4小時。也可在換100 µl新鮮無血清培養(yǎng)基后再加入MTT Stock。 
3. (a) 如果細胞貼壁良好，可吸除培養(yǎng)基，然后每孔加入100µl MTT 溶解劑，此時應注意保持各孔內液體容積一致。
(b) 如果細胞貼壁不佳吸除培養(yǎng)基會導致MTT生成的結晶丟失，則直接在孔內加入100µl MTT溶解劑，注意此時測試孔和對照空內原有的液體積應并保持一致。37 ºC培養(yǎng)箱內繼續(xù)孵育4小時。顯微鏡觀察紫色結晶狀formazan沉積物應全部溶解，這通常需要2~4 h但隨細胞類型、數(shù)量、活力變化。如未完全溶解應延長孵育時間。顯微鏡觀察一旦結晶溶解完畢應盡快測定OD吸光度值。
4. 在570nm測定OD吸光度并進行比較計算。如無570nm濾光片可用500-600nm范圍內的濾光片。注意：為準確考慮可在699 nm處測定未還原的MTT本身的吸光度OD值， 然后用OD570減去OD699。這在進行3(b)操作時尤為必要。

說明：
1. 在進行培養(yǎng)或檢測反應時應觀察培養(yǎng)基是否蒸發(fā)減少?？捎梅饪谀げ糠址忾]培養(yǎng)板。
2. 微生物污染將導致測定結果不準確。另外，如果MTT Stock由黃色變灰綠色應棄去。MTT Stock預先稀釋于培養(yǎng)基中配制成工作液，通常在4ºC一周內穩(wěn)定。
3. 可在非96孔板進行MTT Assay，需要成比例加大反應體系。反應后用比色杯測定OD。 
4. 濃度高于10%血清將降低靈敏度。使用不含酚紅的培養(yǎng)基將使靈敏度提高約20%。