熱穩(wěn)定無機(jī)焦磷酸酶純化自重組 E. coli 菌株,攜帶從極度耐熱的 Thermococus litoralis 中克隆的無機(jī)焦磷酸酶基因。該焦磷酸酶催化無機(jī)焦磷酸鹽水解生成正磷酸鹽。 P207–4 + H20 →2HP04–2。該酶在100℃加熱4h仍然具有100%活性,因此可用于PCR反應(yīng),解除生成的無機(jī)焦磷酸鹽對(duì)PCR的抑制,增強(qiáng)DNA的復(fù)制。
組分
組分名稱 數(shù)量 Thermostable Inorganic Pyrophosphatase (2 U/μl) 100 μl/1 ml
活性定義
1單位指標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)條件下:0.5ml反應(yīng)體系,50mM Tricine pH8.5,1mM MgCl2和0.32mM PPi,75℃反應(yīng)10 鐘,每分鐘催化無機(jī)焦磷酸鹽生成1μmol 磷酸鹽的酶量。
儲(chǔ)存
-20℃可保存3年。
使用注意事項(xiàng)
(1) 該酶在多種反應(yīng)Buffer中均具有活性,通常該酶在tHDA擴(kuò)增、PCR、測(cè)序反應(yīng)等實(shí)驗(yàn)中,可直接接入即可。 (2) 該酶的用量在不同的實(shí)驗(yàn)中需要優(yōu)化,通常在5~50U/ml濃度調(diào)整。 (3) 該酶不可以熱失活。
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