Benzonase核酸酶,是一種核酸內(nèi)切酶,可將核酸降解成2~5個堿基的5‘單磷酸核苷酸,因其能高效降解任何形式(雙鏈,單鏈,線狀,環(huán)狀)的DNA和RNA而沒有蛋白裂解活性,又被稱為“全能核酸酶”。Benzonase核酸酶能有效降低蛋白樣品粘度,去除蛋白樣品中核酸的污染,且無蛋白酶活性殘留和內(nèi)毒素污染,核酸酶活性達(dá)1×106 U/mg蛋白。Benzonase核酸酶在降低粘性的同時, 也具有多種其他用途,如:減少了樣品處理時間,增加了蛋白產(chǎn)量,離心時時沉淀和上清分離的更徹底,更便于溶液的離心(尤其是超濾);提高色譜純化的效率等。
單位定義
37℃,pH 8.0反應(yīng)條件下,在30分鐘內(nèi)使△A260 值降低1.0(相當(dāng)于完全消化37 μg DNA )的酶量定義為一個活性單位。 注意:含大量蛋白、細(xì)胞壁、其它鹽分的粗制品,對該酶活性有部分抑制作用,使用時需要增加酶的用量。
應(yīng)用
蛋白提取時去除核酸污染:在重組蛋白純化或組織細(xì)胞樣品蛋白提取時,Benzonase核酸酶可有效降低樣品粘度,利于下游操作 與細(xì)胞或細(xì)菌裂解液配合使用,去除粗提物中的核酸,降低溶液粘性,提高蛋白質(zhì)產(chǎn)量 減少存放的外周血單細(xì)胞(PBMC)的結(jié)塊現(xiàn)象 降解核酸,利于不可溶性蛋白復(fù)性前高質(zhì)量包涵體制備 有效去除帶負(fù)電荷的核酸對雙向SDS-PAGE蛋白樣品的影響,改善蛋白質(zhì)的分離效果,增強2-DE分辨率 疫苗和病毒樣品制備中DNA污染的去除
超強兼容性
全能核酸酶在非常廣泛的條件下,都能保持很高的穩(wěn)定性和消化核酸的活性,這使其能夠與多種細(xì)胞裂解液,如RIPA,或含有多種離子和非離子型去污劑、還原劑的蛋白提取試劑等兼容。例如:>100mM的鹽酸胍會完全抑制Benzonase活性,1mM的EDTA會部分抑制Benzonase活性,5mM的EDTA會使活性喪失90%,1mM的PMSF則不會抑制核酸酶活性。 濃度<0.4%的Triton® X-100對核酸酶活性幾乎無影響,<0.4%的脫氧膽酸鈉使核酸酶可保持70%的活性,超過該臨界值之后核酸酶活性會急劇降低,1%的濃度會使活性喪失70%;0.05%的SDS對核酸酶活性幾乎無影響,而SDS濃度在0.1%-1%之間時,核酸酶在變性后活性會急劇降低,可通過增加核酸酶的量使活性得到補償。另外,核酸酶可耐受6M尿素,當(dāng)尿素達(dá)到7M時,核酸酶在變性后活性會急劇降低,亦可通過增加核酸酶的量使活性得到補償。
儲存
置于-20°C,可保存2年。
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