TaqMan miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒采用加A法進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，加A法的反轉(zhuǎn)錄效率遠(yuǎn)高于莖環(huán)法，因此，采用該方法可極大的提高檢測靈敏度。該試劑盒操作簡單，僅需要兩步即可輕松完成miRNA的cDNA合成，合成的cDNA可用于所有miRNA的后續(xù)定量檢測。TaqMan miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒專用于miRNAs分子的反轉(zhuǎn)錄試驗(yàn)，轉(zhuǎn)錄獲得的cDNA產(chǎn)物用于TaqMan定量PCR方法檢測miRNAs分子（僅適用于Biorab TaqMan miRNA定量PCR試劑盒，貨號：MTTxxxxx）。


TaqMan miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒原理圖

產(chǎn)品組成：

儲存：請置于-20℃，可保存2年；避免反復(fù)凍融。

操作方法：
1．按以下組分在0.2ml EP管中配制應(yīng)液：
  miRNA（5～100 ng/μl）————————————4μl
  5×TaqMan miRNA RT Solution A—————————1μl注意：不建議使用Total RNA，Total RNA 試驗(yàn)結(jié)果通常差于miRNA。
2．在PCR 儀上按以下條件進(jìn)行加 A 反應(yīng)：
  37℃———————30分鐘
  85℃———————5分鐘
3．反應(yīng)完畢后，在上述5μl 反應(yīng)體系中加入如下試劑，并混合均勻。
  10×TaqMan miRNA RT Primer—————————2μl
  10×TaqMan miRNA RT Solution B———————2μl
  H2O————————————————————11μl
4．在PCR 儀上按以下條件進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng):
  30℃———————5分鐘
  55℃———————60min
  95℃———————5分鐘
獲得的cDNA 產(chǎn)物可用于多個目標(biāo) miRNA的檢測。反轉(zhuǎn)錄完畢后獲得的miRNA cDNA，可加入20～80μl ddH20 稀釋2～5 倍，通常取2μl即可用于 TaqMan miRNA 定量 PCR 試劑盒檢測(貨號：MTTxxxxx，該試劑盒有一萬余種，詳細(xì)列表可查詢 TaqMan miRNA qPCR kit.xls)。
5．利用TaqMan qPCR Kit 對上述miRNA cDNA 產(chǎn)物進(jìn)行 RealTime PCR 檢測。