??????碧云天的質(zhì)粒中量抽提試劑盒(通用型) (Plasmid Midi Preparation Kit for All Purpose, Plasmid Midiprep Kit for All
Prupose)是一種用于從大腸桿菌中進(jìn)行中量質(zhì)?？焖俪樘岬耐ㄓ眯碗x心柱式試劑盒。
??????本試劑盒不僅適用于常用的EndA^-菌株DH5α、JM109和XL-1?blue等，也適用于EndA⁺菌株如JM110、BL21(DE3)、TG1和HB101等，能有效避免EndA⁺菌株中高豐度核酸酶的污染，并適用于從糖類修飾水平高的野生菌株中提取質(zhì)粒。
??????野生型大腸桿菌中表達(dá)Endonuclease?I，能切割并降解雙鏈DNA。編碼Endonuclease?I的基因是endA，如果endA突變失活，其基因型會(huì)被標(biāo)注為endA1，相應(yīng)的突變菌株被稱為EndA^-菌株，而野生型菌株則被稱為EndA⁺菌株。常見的EndA^-和EndA⁺菌株參見附表1。從EndA⁺菌株中抽提的質(zhì)粒，微量核酸酶和質(zhì)粒結(jié)合而容易被共純化，導(dǎo)致容易降解，而本試劑盒增加了特殊的洗滌步驟(核酸酶洗滌液溶液PB洗滌)，可以有效避免EndA⁺菌株中抽提獲得的質(zhì)粒容易降解的問題(參考圖1)。

??????圖1.?使用溶液PB可以使從EndA⁺菌株JM110中抽提的質(zhì)粒不易降解，而對(duì)于EndA^-菌株DH5α中抽提的質(zhì)粒沒有影響。使用本試劑盒時(shí)，如上圖所示，在使用和不使用溶液PB時(shí)的質(zhì)粒得率一致。但對(duì)于EndA⁺菌株JM110，不使用溶液PB時(shí)從其中抽提獲得的質(zhì)粒在內(nèi)切酶緩沖液Buffer Y中37℃孵育1小時(shí)后會(huì)全部降解，而使用溶液PB時(shí)同樣孵育1小時(shí)就不會(huì)降解。對(duì)于EndA^-菌株DH5α無論是否使用溶液PB，抽提獲得的質(zhì)粒的都很穩(wěn)定。

??????本試劑盒采用了一種新型的離子交換柱。在特定條件下，使質(zhì)粒能在離心過柱的瞬間，結(jié)合到質(zhì)粒純化柱上，在一定條件下又能將質(zhì)粒充分洗脫，從而實(shí)現(xiàn)質(zhì)粒的快速純化。無需酚氯仿抽提，無需酒精沉淀，12個(gè)樣品只需不足60分鐘即可完成。
??????無需高速冷凍離心機(jī)，只需普通臺(tái)式高速離心機(jī)。所有操作均可在1.5ml離心管中完成。
??????每個(gè)質(zhì)粒純化柱可以結(jié)合的質(zhì)粒量的上限約為50微克。每個(gè)純化柱可用于抽提5-10毫升用LB培養(yǎng)過夜的大腸桿菌。抽提所得質(zhì)粒的OD260和OD280比值一般在1.80左右。抽提獲得的質(zhì)粒量會(huì)受質(zhì)?？截悢?shù)等因素影響。抽提獲得的質(zhì)粒DNA的OD260和OD280比值也會(huì)因菌種不同等原因而略有波動(dòng)。
??????本試劑盒抽提所得到的質(zhì)?？芍苯佑糜谵D(zhuǎn)染細(xì)胞，DNA測(cè)序，PCR，基于PCR的突變，體外轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)化細(xì)菌，內(nèi)切酶消化等。本試劑盒在使用溶液PB的情況下，獲得的質(zhì)粒的純度更高，內(nèi)毒素含量低，總體上轉(zhuǎn)染細(xì)胞的效率會(huì)顯著提高。
包裝清單：

保存條件：
??????室溫保存，一年有效。
注意事項(xiàng)：
??????次使用前把試劑盒提供的RNase A全部加到溶液I (懸浮液)中，混勻，并在瓶上做好標(biāo)記。加入RNase A后4℃存放。
??????次使用前在溶液IV (洗滌液)中加入27ml無水乙醇，混勻，并在瓶上做好標(biāo)記。
??????溫度較低時(shí)，溶液II和溶液III可能會(huì)有沉淀產(chǎn)生。使用前必須檢查一遍。如有沉淀，37℃水浴加熱溶解，混勻后使用。溶液II請(qǐng)勿過分劇烈混勻，否則會(huì)產(chǎn)生大量氣泡。
??????溶液II使用完后，一定要蓋緊瓶蓋，防止被空氣中二氧化碳酸化。
??????溶液II有強(qiáng)堿性，溶液II、溶液III、溶液PB和溶液IV對(duì)人體有刺激性，操作時(shí)請(qǐng)小心，并注意適當(dāng)防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
??????本試劑盒所有操作均在室溫進(jìn)行，操作時(shí)無需冰浴。所有離心也均在室溫進(jìn)行。
??????廢液收集管在一次抽提中需多次使用，切勿中途丟棄。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。