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本品產(chǎn)僅供科研
產(chǎn)品名稱(chēng):斑點(diǎn)病密螺旋體染料法熒光定量PCR試劑盒Treponema carateum
產(chǎn)品規(guī)格:50次/盒
本產(chǎn)品是以染料法熒光定量PCR技術(shù)為基礎(chǔ)開(kāi)發(fā)的PCR試劑盒,它具有下列特點(diǎn):
1.即開(kāi)即用,用戶(hù)只需要提供樣品DNA模板。
2.引物等組分經(jīng)過(guò)優(yōu)化,靈敏度高。
3.提供陽(yáng)性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4.特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟其他的DNA/RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5.既可用于定性檢測(cè),又可用于定量檢測(cè)。用于定量檢測(cè)時(shí)線性范圍至少為5個(gè)數(shù)量級(jí)。
6.本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的染料法熒光定量PCR反應(yīng)。
7. 本產(chǎn)品只能用于科研
斑點(diǎn)病密螺旋體染料法熒光定量PCR試劑盒Treponema carateum操作方法一、制備標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,
千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,
只提供無(wú)傳染性的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1.標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
2.用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專(zhuān)用模板稀釋液,最好用帶芯槍頭,下同)。
3.在7號(hào)管中加入5 μL 陽(yáng)性對(duì)照(其濃度為1×10E8拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4.換槍頭,在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5.換槍頭,在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6.重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
1.用自選方法純化樣品的DNA,本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
2.如果有N個(gè)樣品,則需要進(jìn)行N+2個(gè)樣品提取,多出的一個(gè)用作樣品制備陽(yáng)性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20μL體系,在樣品制備室進(jìn)行)
如果進(jìn)行定量分析,則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照,6個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。
如果做定性分析,則6個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品只選一個(gè)做(可以選4號(hào),其余樣品不變)。以下只介紹定量分析的反應(yīng)設(shè)置。
四、數(shù)據(jù)處理
1.通過(guò)溶解曲線分析的結(jié)果排除無(wú)效數(shù)據(jù)。有Ct值,但Tm值跟陽(yáng)性對(duì)照Tm不一樣的樣品(包括對(duì)照和待測(cè)樣品),歸為假陽(yáng)性,數(shù)據(jù)無(wú)效,不予以分析。Tm跟陽(yáng)性對(duì)照Tm一致的,為有效Ct。
2.如果兩種陰性對(duì)照的溶解曲線所得Tm值跟陽(yáng)性對(duì)照的Tm值一樣,說(shuō)明環(huán)境或試劑可能有過(guò)去的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物污染,則此次實(shí)驗(yàn)無(wú)效,需要解決污染問(wèn)題再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
3.如果兩種陰性對(duì)照(樣品制備陰性對(duì)照和PCR陰性對(duì)照)是假陽(yáng)性,可以繼續(xù)分析其它樣品有效數(shù)據(jù)。
4.對(duì)定量檢測(cè),以陽(yáng)性對(duì)照樣品的濃度的log值為橫軸,以有效Ct值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的有效Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品DNA濃度的log值,再換算出待測(cè)樣品的DNA濃度。
5.對(duì)定性檢測(cè),則有有效Ct值的為陽(yáng)性,無(wú)有效Ct值的為陰性。
斑點(diǎn)病密螺旋體染料法熒光定量PCR試劑盒Treponema carateum樣本采集、存放及運(yùn)輸:
1、樣本采集:各類(lèi)型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、運(yùn)輸及保存:低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限一年。陽(yáng)性對(duì)照需單獨(dú)放置,不要污染其他試劑。
3、運(yùn)輸:采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
4、自備試劑:樣品DNA。
斑點(diǎn)病密螺旋體染料法熒光定量PCR試劑盒Treponema carateum注意事項(xiàng)
1所有操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行
2試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,混勻并短暫離心;
3 反應(yīng)液應(yīng)避光保存;
4反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;
5使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專(zhuān)用工作服;
6 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,以免交叉污染;
7 實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器;
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關(guān)鍵字: 斑點(diǎn)病密螺旋體染料法熒光定量PCR試劑盒;Treponema carateum;斑點(diǎn)病密螺旋體染料法熒光定量PCR試劑盒;PCR檢測(cè)試劑盒;晶風(fēng)PCR試劑盒;
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