植物血凝素(Phytohemagglutinin,PHA)
——最常用的促有絲分裂原(Mitogen)
關(guān)鍵詞:淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)(T Lymphocyte Transformation Test),非特異性有絲分裂原(mitogen),T細(xì)胞活化和增殖,PHA-M,PHA-P,PHA-L,PHA-E,Con A,CAS:9008-97-3
T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)(T Lymphocyte Transformation Test)背景與意義:T細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí),受到非特異性有絲分裂原(如PHA、ConA)刺激后,可出現(xiàn)細(xì)胞體積增大,代謝旺盛,蛋白和核酸合成增加,即向淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化。淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的高低可以反映機(jī)體的細(xì)胞免疫水平,因此可作為測(cè)定機(jī)體免疫功能的指標(biāo)之一。
Phytohemagglutinin(植物血凝素),簡(jiǎn)稱為PHA,多指來(lái)源于Phaseolus Vulgaris菜豆屬(紅腰豆)的凝集素(lectin),常用于人淋巴細(xì)胞培養(yǎng)物的促有絲分裂原(mitogen),具有促進(jìn)有絲分裂和誘導(dǎo)干擾素分泌的活性。PHA誘導(dǎo)B細(xì)胞活化效應(yīng)比較弱,主要用做T細(xì)胞活化誘導(dǎo)劑。
植物血凝素(PHA)屬于高分子糖蛋白,是低聚糖(由半乳糖,N-乙酰葡糖胺和甘露糖所構(gòu)成)和蛋白質(zhì)形成的復(fù)合物。由4個(gè)亞基通過(guò)非共價(jià)鍵結(jié)合形成的四聚體糖蛋白,包含兩種亞基分子,L亞基(白細(xì)胞凝集素)和E(紅細(xì)胞凝集素),因此含有5種異構(gòu)體(L4, L3E1, L2E2, L1E3和E4)。L亞基具有白細(xì)胞凝集和高促有絲分裂活性,E亞基具有高紅細(xì)胞凝集和低促有絲分裂活性。
目前市場(chǎng)上提供的植物血凝素(PHA)主要以PHA-L,PHA-E,PHA-M和PHA-P四種形式提供,在應(yīng)用上具有一些差異,具體如下:
純化的L4,是白細(xì)胞凝集素,具有高促有絲分裂和白細(xì)胞凝集活性,但紅細(xì)胞凝集活性極低。廣泛用于免疫學(xué)研究,比如用作PBMC培養(yǎng)的刺激物;用作INF-γ ICS、ELISPOT實(shí)驗(yàn)的陽(yáng)性對(duì)照;或用作順行性神經(jīng)示蹤劑。
純化的E4,是紅細(xì)胞凝集素,具有低促有絲分裂活性和高紅細(xì)胞凝集活性。不具有血型特異性,但凝集作用會(huì)受到某些寡糖抑制。也常用于糖基化修飾研究。
為未分離純化PHA-E和PHA-L之前的原PHA蛋白形式(含PHA-E及PHA-L二種分子)。
PHA的粘性蛋白形式(mucoprotein form),與PHA-P成分差不多,都是粗提物,主要用于刺激外周血單個(gè)核細(xì)胞增殖,促進(jìn)一些細(xì)胞因子生成和膜表面蛋白的表達(dá)。PHA-M具有強(qiáng)大的紅細(xì)胞凝集特性,最初用來(lái)分離全血中的淋巴細(xì)胞。
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