產(chǎn)品名稱：隱球菌染料法熒光定量PCR試劑盒

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本產(chǎn)品就是根據(jù)PCR原理專門開發(fā)的試劑盒，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。

2. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

3. 產(chǎn)品精心優(yōu)化且特異性高，引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計，不會跟除此之外的其它微生物DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。

4. PCR mix中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。

5. 本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的PCR反應(yīng)。

6. 本產(chǎn)品只能用于定性實驗，不能用于定量。

7. 本產(chǎn)品只能用于科研

包裝規(guī)格及成分（具體信息詳見說明書）：

隱球菌染料法熒光定量PCR試劑盒的制備　

1. 用自選方法純化N+2個樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。

2. 如果有N個樣品，則需要做N+2個提取，包括一個樣品制備陽性對照和一個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 差異支原體 PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋液而得，樣品制備陰性對照是直接用水。提取結(jié)束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。

電泳分析　
1. 取 5-10uL 擴增產(chǎn)物進行常規(guī)瓊脂糖電泳，檢測擴增效果，由于擴增產(chǎn)物較短，建議用 1.5%-2.0%的瓊脂糖凝膠。

2. 陽性樣品預(yù)期得到的擴增產(chǎn)物長度為 200bp 左右。如果兩個陰性對照（樣品制備陰性對照或 PCR 陰性對照）有此擴增產(chǎn)物，說明環(huán)境污染，則整個實驗無效，不需要分析實驗結(jié)果。

3. 如果所有樣品和 PCR 陽性對照均無此擴增產(chǎn)物，則說明有系統(tǒng)性的問題（試劑、設(shè)備、程序、操作等），需要重復(fù)并排查原因。

4. 如果沒有上述兩種情況，則實驗有效，可以分析樣品的擴增結(jié)果。N+2 個樣品中有擴增產(chǎn)物的判定為陽性，無則判定為陰性。

隱球菌染料法熒光定量PCR試劑盒樣本采集、存放及運輸：

1、樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；

2、運輸及保存：低溫運輸，-20℃保存，保存期限一年。陽性對照需單獨放置，不要污染其他試劑。

3、運輸：采用泡沫箱加冰密封進行運輸。

4、自備試劑：樣品DNA。

隱球菌染料法熒光定量PCR試劑盒注意事項：

1.整個檢測過程應(yīng)嚴格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作，各區(qū)實驗服、儀器、耗材應(yīng)獨立使用，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進行操作；三個區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。

2.為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。

3.每次實驗應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。

4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時離心。

5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨存放。

6.為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進行任何標(biāo)記。

7.儀器擴增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進行設(shè)置；不同批號試劑不能混用。

8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。

9.實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進行無害化處理后方可丟棄。

隱球菌染料法熒光定量PCR試劑盒相關(guān)產(chǎn)品如下：