Cas 115144-35-9  D-熒光素鉀鹽

簡介:

熒光素（Luciferin）是常見生物性發(fā)光報告基因熒光素酶（Luciferase）在體內(nèi)成像的底物。作用原理是熒光素酶在Mg2+和O2參與下催化熒光素氧化成oxyluciferin,在熒光素的氧化過程中，發(fā)出藍(lán)綠色(560nm)生物熒光(bioluminomescence),當(dāng)?shù)孜镞^量時，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān),通過化學(xué)發(fā)光儀或液閃測定儀測定生物熒光,由于沒有背景干擾，因此可以很容易地檢測出低至0.02 pg 水平的熒光素酶。目前市場上有三種產(chǎn)品形式，D-熒光素（游離酸），D-熒光素鈉鹽，以及D-熒光素鉀鹽。這三種產(chǎn)品主要的差別在于溶解特性上。D-熒光素（游離酸）水溶性以及緩沖體系的溶解性都很弱，除非溶于弱堿如NaOH和KOH溶液。溶于甲醇（10 mg/ml）和DMSO（50 mg/ml）。但鈉鹽和鉀鹽形式的D-熒光素能夠非常容易且快速的溶入水或者緩沖液中，使用方便，溶劑無毒性，特別適合體內(nèi)實驗。配成液體后的這三種產(chǎn)品，在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒有實質(zhì)性的差別。

外觀:淡黃色或白色固體粉末

儲存:-20℃低溫避光保存

溶解:溶于水(60mg/mL)

用途:

1)活細(xì)胞、組織或生物體內(nèi)luc標(biāo)記基因和熒光素酶-融合基因體內(nèi)/體外表達(dá)的成像分析；

2）廣泛用于報告基因分析，免疫分析和ATP熒光衛(wèi)生監(jiān)測分析；

使用方法:

1：In Vitro Bioluminescent Assays/體外生物發(fā)光檢測

1）配制成100 mM的儲存液（200×，濃度30mg/ml）?；靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b后-20℃凍存。

2）用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基1∶200稀釋儲存液，配制工作液(終濃度150μg/mL)。

3）去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基直至無殘留。

4）圖像分析前立即向細(xì)胞內(nèi)添加1×熒光素工作液，然后進(jìn)行圖像分析（或者細(xì)胞放在37℃短時間孵育后檢測可增強(qiáng)信號）。

2：In vivo analysis in mice /小鼠活體成像分析

1）用無菌的DPBS（w/o Mg2+、Ca2+）配制D-熒光素鉀鹽溶液(15mg/mL)，0.2um濾膜過濾除菌。一旦使用，保持冰冷且避光。

2）按10 μL/g體重的濃度向每支小鼠注射相應(yīng)量的15mg/mL熒光素溶液；

3）腹腔注射10-15 min后進(jìn)行成像分析。（對每只動物模型做熒光素動力學(xué)研究以確定峰值信號獲取時間）

注意事項：

1）本品保存和操作的過程中都要避光。另外儲存液過濾除菌后，-80℃分裝保存，避免反復(fù)凍融。如果有條件，對儲存液充氮氣或氬氣（防止氧化），穩(wěn)定性和保存時間更長，長達(dá)1年。

2）注射方式，動物類型以及體重等都會影響信號的發(fā)射，因此建議每次實驗都要做熒光素酶動力學(xué)曲線，確定最佳信號平臺期和最佳的檢測時間。