GAPDH敲低通過自噬和抗氧化應激途徑減少魚藤酮誘導的H9C2細胞死亡。[Pubmed：25725130]

2015 年 5 月 5 日;234(3):162-71.

GAPDH以其管家功能而聞名，也被證明在饑餓、化學損傷和氧化應激等壓力條件下參與細胞損傷、細胞凋亡和死亡。本研究考察了 GAPDH 敲低對魚藤酮反應細胞損傷的影響。
方法和結果：
在暴露于魚藤酮（0 nM、20 nM、40 nM 和 80 nM）之前，使用 siRNA 在 H9C2 心肌成細胞中敲低 GAPDH。通過蛋白質印跡檢測自噬蛋白（Beclin-1、Atg5、LC-3A/B 和 p62）的自噬，并通過 MDC 染色檢測酸性物質。使用促細胞凋亡蛋白和流式細胞術評估細胞凋亡和死亡，并測量細胞內 ATP 相對濃度。通過測量DCFH-DA、TBARS、GSH和SOD來評估氧化應激。 在這項研究中，GAPDH敲低增強了魚藤酮誘導的H9C2細胞的自噬，減少了氧化應激，增加了抗氧化途徑;并減少細胞凋亡和死亡。此外，GAPDH敲低保留了細胞能量。
結論：
siRNA介導的GAPDH敲低減少了魚藤酮誘導的H9C2細胞死亡，通過自噬和抗氧化應激途徑發(fā)生。本研究豐富了對GAPDH病理生理作用的理解，為以氧化應激為特征的心臟病狀態(tài)提供了潛在的新治療靶點。

JNK 抑制 VMAT2 有助于魚藤酮誘導的氧化應激和多巴胺神經(jīng)元死亡。[Pubmed： 25496994]

毒物學。2015 2 月 3;328：75-81.

魚藤酮治療，無論是體外還是體內，都被廣泛用于模擬帕金森病在暴露于環(huán)境神經(jīng)毒物和殺蟲劑時的多巴胺神經(jīng)元死亡。魚藤酮神經(jīng)毒性的潛在機制仍在確定中。
方法和結果：
我們最近的研究表明，魚藤酮誘導的多巴胺神經(jīng)元死亡涉及微管不穩(wěn)定，這導致胞質多巴胺的積累，從而導致活性氧 （ROS）。此外，魚藤酮誘導的多巴胺神經(jīng)元死亡需要 c-Jun N 末端蛋白激酶 （JNK）。在這里，我們報告了 JNK 的神經(jīng)特異性 JNK3 亞型，而不是 JNK1 或 JNK2，是原代培養(yǎng)的多巴胺神經(jīng)元中這種神經(jīng)元死亡的原因。用紫杉醇（一種微管穩(wěn)定劑）治療可減弱魚藤酮誘導的磷酸化，并可能減弱 JNK 的激活。這表明 JNK 在魚藤酮暴露時被微管不穩(wěn)定激活。此外，魚藤酮抑制 VMAT2 活性，但不抑制 VMAT2 蛋白水平。值得注意的是，用 JNK 的藥理學抑制劑 SP600125 治療可減弱魚藤酮對 VMAT2 的抑制。此外，重組 JNK3 蛋白與純化的中腦突觸囊泡體外孵育后 VMAT2 活性降低表明 JNK3 可以抑制 VMAT2 活性。
結論：
結合我們之前的研究結果，這些結果表明魚藤酮通過一系列連續(xù)事件誘導多巴胺神經(jīng)元死亡，包括微管不穩(wěn)定、JNK3 激活、VMAT2 抑制、胞質多巴胺積累和 ROS 的產(chǎn)生。我們的數(shù)據(jù)確定 JNK3 是 VMAT2 活性的新型調節(jié)因子。

魚藤酮降低細胞內醛脫氫酶活性：對帕金森病發(fā)病機制的影響。[Pubmed：25645689]

J 神經(jīng)化學。2015年4月;133(1):14-25.

線粒體復合物 I 抑制劑魚藤酮的重復全身給藥可產(chǎn)生帕金森病 （PD） 的嚙齒動物模型。魚藤酮誘導的黑質紋狀體多巴胺能神經(jīng)元損傷的相對選擇性機制仍不完全清楚。 根據(jù)“兒茶酚醛假說”，自身毒性多巴胺代謝物 3,4-二羥基苯乙醛 （DOPAL） 的積聚會導致 PD 發(fā)病機制。囊泡攝取阻斷會增加DOPAL水平，DOPAL主要通過醛脫氫酶（ALDH）解毒。
方法和結果：
我們測試了魚藤酮是否干擾囊泡攝取和細胞內ALDH活性。在與魚藤酮（0-1000 nM，180分鐘）一起孵育的PC12細胞中測量內源性和F標記的兒茶酚，不含或與F-多巴胺（2μM）一起孵育，以跟蹤囊泡攝取和兒茶酚胺代謝。魚藤酮劑量依賴性地增加多巴、F-多帕爾和3,4-二羥基苯乙醇（DOPET）水平，同時降低多巴胺和3,4-二羥基苯乙酸（DOPAC）水平以及多巴胺與其脫氨代謝物總和的比率。在試管中，當提供NAD（+）時，魚藤酮不影響ALDH將DOPAL轉化為DOPAC，而直接作用的ALDH抑制劑苯諾酰顯著增加DOPAL并降低反應混合物中的DOPAC濃度。我們提出魚藤酮通過降低ALDH活性和減弱細胞質兒茶酚胺的囊泡隔離來建立細胞內DOPAL。
結論：
研究結果為魚藤酮誘導的多巴胺能神經(jīng)元選擇性毒性提供了新的機制。我們報告說，魚藤酮是一種產(chǎn)生帕金森病動物模型的線粒體復合物 I 抑制劑，通過減少醛脫氫酶 （ALDH） 的 DOPAL 代謝和減少囊泡單胺轉運蛋白 （VMAT） 對細胞質多巴胺的囊泡隔離，增加有毒多巴胺代謝物 3,4-二羥基苯乙醛 （DOPAL） 的細胞內水平。研究結果為魚藤酮誘導的多巴胺能神經(jīng)元毒性提供了新的機制。