方法與結(jié)果:采用MTT法、流式細(xì)胞術(shù)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blotting法評價(jià)Thonningianin A對HepG-2人肝細(xì)胞癌細(xì)胞系的抗癌活性。結(jié)果表明,Thonningianin A通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡有效抑制HepG-2細(xì)胞的增殖,表現(xiàn)為亞G1細(xì)胞群的增加、DNA片段化和活性氧含量的增加。caspase-9 的激活和隨后的 caspase-3 的激活表明 Thonningianin A 誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡是半胱天冬酶依賴性的。Thonningianin A 還破壞了 HepG-2 細(xì)胞中的線粒體膜電位 (Δψm) 并下調(diào)了 Bcl-xL mRNA 的表達(dá)。Thonningianin A 通過改變細(xì)胞周期蛋白 D1 和 CDK4 mRNA 表達(dá)水平誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯。此外,Western blotting顯示Thonningianin A顯著下調(diào)NF-κ-B細(xì)胞存活途徑,磷酸化P38表達(dá)水平上調(diào),磷酸化ERK表達(dá)水平下調(diào)。結(jié)論:Thonningianin A的抗癌活性通過DNA片段化和細(xì)胞周期停滯的特征模式得到證實(shí),表明ThA是天然植物性食品中有效的抗腫瘤成分,值得進(jìn)一步研究。
采用NADPH和Fe2+/抗壞血酸誘導(dǎo)的脂質(zhì)過氧化(LPO)、電子自旋共振波譜儀和脫氧核糖測定法研究了從非洲藥草Thonningia sanguinea的甲醇提取物中分離出的鞣花單寧Thonningianin A(Th A)的抗氧化特性。方法和結(jié)果:10 μM 的 Thonningianin A 抑制大鼠肝微粒體中 NADPH 和 Fe2+/抗壞血酸誘導(dǎo)的 LPO 60%,對細(xì)胞色素 P450 活性沒有抑制作用。Thonningianin A 類似于合成抗氧化劑單寧酸,作為 NADPH 和 Fe2+/抗壞血酸誘導(dǎo)的 LPO 的抑制劑,但比沒食子酸、維生素 C 和維生素 E 更有效。雖然Thonningianin A對Fenton反應(yīng)產(chǎn)生的羥基自由基的清除效果不佳,但它對1,1-二苯基-2-三硝基肼基、超氧陰離子和過氧自由基的劑量依賴性清除,IC50分別為7.5、10和30μM。此外,Thonningianin A 對黃嘌呤氧化酶的活性具有抑制作用,IC50 為 30 μM。在脫氧核糖測定中,血錐蟲及其甲醇成分Thonningianin A僅顯示位點(diǎn)特異性(Fe3+ + H2O2),但不顯示非位點(diǎn)特異性(Fe3+ + EDTA + H2O2)羥基自由基清除,表明鐵離子具有螯合能力。結(jié)論:光譜研究表明,在Fe2+離子存在下,Thonningianin A增強(qiáng)了可見光區(qū)域的吸光度。 這些結(jié)果表明,Thonningianin A的抗氧化特性包括自由基清除、抗超氧化物形成和金屬螯合。
有證據(jù)表明,谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(EC:2.5.1.18,GST)的表達(dá)增加與腫瘤細(xì)胞對化療藥物的耐藥性有關(guān)。在這項(xiàng)研究中,我們研究了從草藥Thonningia sanguinea中分離出的新型抗氧化劑Thonningianin A(Th A)對未表征的大鼠肝臟GST和人GST P1-1的抑制作用。方法與結(jié)果:以1-氯-2,4-二硝基苯(CDNB)為底物,Thonningianin A以濃度依賴性方式抑制大鼠肝臟胞質(zhì)GST活性,50%抑制濃度(IC50)為1.1 μM。當(dāng)將Thonningianin A與已知的強(qiáng)效GST抑制劑進(jìn)行比較時(shí),抑制順序是單寧酸>cibacron blue>hematin>Th A>ethacrynic酸,CDNB為底物。Thonningianin A 還表現(xiàn)出對 CDNB 和谷胱甘肽的非競爭性抑制。此外,使用1,2-二氯-4-硝基苯、乙丙烯酸和1,2-環(huán)氧-3-(對硝基苯氧基)丙烷作為底物,在1.0 μM下分別抑制胞質(zhì)GST2%、12%和36%。人 GST P1-1 也被 Thonningianin A 抑制,IC50 為 3.6 μM。結(jié)論:雖然Thonningianin A對CDNB表現(xiàn)出競爭性抑制,但它對人GST P1-1的GSH表現(xiàn)出非競爭性抑制。這些結(jié)果表明,Thonningianin A代表了一種新的有效的體外GST抑制劑。
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王玲