產(chǎn)品簡介
氨基苯基熒光素（APF）和羥苯基熒光素（HPF）是由T. Nagano開發(fā)的兩種活性氧（Reactive oxygen species, ROS）指示劑，比H2DCFDA（DCFH-DA, DCFH）具更優(yōu)秀的特異性和穩(wěn)定性。APF和HPF顯示有限的非選擇性反應，和相對較高的光誘導氧化抗性。APF和HPF具細胞膜滲透性，本身無熒光，直到與羥基自由基或過氧亞硝基陰離子反應，還能與次氯酸陰離子反應，產(chǎn)生強綠色熒光（Ex/Em，~490/515nm），可用熒光顯微鏡、高通量成像儀、熒光酶標板或流式細胞儀檢測。
APF和HPF產(chǎn)生的熒光相對于其他活性氧探針比如DCFH弱很多，這是探針本身的特性決定的(見附表1活性氧探針(HPF,APF, DCFH)對各種活性氧物質(zhì)的反應特異性)。
本品以粉末形式提供，可直接溶于無水DMSO配制成10mM儲存液，常用工作濃度范圍1-10μM，需根據(jù)自身的實驗體系或參考文獻進行優(yōu)化。
基本特性
CAS：359010-70-1
同義名：3'-(p-aminophenyl) fluorescein氨基苯基熒光素
分子式： C26H17NO5
分子量：423.42
純度：≥95%
Ex/Em：:492/515nm
溶解性：溶于DMSO（10mM）、DMF（5mM）
儲存條件：-20℃干燥保存，2年有效。
使用方法（以下步驟僅做參考，具體請根據(jù)實際情況或參考文獻資料來調(diào)整。）
一、儲存液制備
將低溫保存的1mg粉末置于室溫回溫至少20min，之后加入471μl 無水DMF配置成5mM儲存液。充分溶解和混勻后，按照單次用量分裝，-20oC避光干燥保存，避免反復凍融。
【注】：APF能溶于DMSO（10mM），但有數(shù)據(jù)顯示DMSO是羥基自由基的淬滅劑，會干擾檢測和降低靈敏性。因此，建議用DMF作為溶劑。
二、溶液體系檢測
正式實驗前，取一管APF儲存液置于室溫回溫，使其充分融解。之后用合適的緩沖液（比如HHBS緩沖液，PBS緩沖液）稀釋到所需的工作濃度。建議起始濃度為1-10μM，需根據(jù)自身的實驗體系或參考文獻進行優(yōu)化。
三、細胞體系檢測
以下實驗步驟僅做參考，最佳的工作濃度、孵育時間和溫度需根據(jù)實際情況進行調(diào)整。在加入APF工作液之前按需處理細胞。
1）根據(jù)具體用量，將DMF儲存液用HHBS緩沖液或其他生理緩沖液稀釋成1-10μM工作液。
2）根據(jù)實驗設計處理細胞（比如，RASM細胞用50-100nM 血管緊張素II處理3-5h）。
3）取步驟1）準備的1-10μM工作液加入細胞，37oC孵育20-60min。
4）吸掉染色工作液，用HHBS或其他生理緩沖液替換。
5）用合適的熒光儀器（Ex/Em=492/515nm）來檢測。
【注1】：BSA和酚紅會影響熒光，需謹慎使用。
【注2】：HPF和APF能用于溶液體系或胞內(nèi)ROS檢測。
附表1活性氧探針(HPF, APF, DCFH)對各種活性氧物質(zhì)的反應特異性
ROS | ROS產(chǎn)生方法 | HPF(CAT#FS03145) | APF(CAT#FS03146) | DCFH(CAT#FS1176) |
HO· | 100 μM高氯酸亞鐵(I)+1 mMH2O2 | 730 | 1200 | 7400 |
ONOO- | 3 μM (終濃度) ONOO- | 120 | 560 | 6600 |
OCI- | 3μM (終濃度) OCI- | 6 | 3600 | 86 |
1O2 | 100μM 3-(1,4-dihydro-1,4-epidioxy-1-naphthyl)propionic acid | 5 | 9 | 26 |
·O2- | 100uM KO2 | 8 | 6 | 67 |
H2O2 | 100 μM of H2O2 | 2 | ＜1 | 190 |
NO | 100 μM NOC-7 | 6 | ＜1 | 150 |
ROO· | 100 μM AAPH | 17 | 2 | 710 |
Autoxidation | 熒光光照2.5h | ＜1 | ＜1 | 2000 |
注意事項
（1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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關鍵字： 氨基苯基熒光素（APF）;羥苯基熒光素（HPF）;H2DCFDA（DCFH-DA, DCF;Reactive oxygen spec;活性氧探針;
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