筆環(huán)肽是一種從鬼筆鵝膏中得到的有毒的環(huán)狀七肽,可以與纖維肌動蛋白絲非常特異的結(jié)合,并且具有很高的親和力。它能使肌動蛋白聚合物的臨界濃度降低到小于1μg/mL,因此,常作為一種聚合促進劑使用。該物質(zhì)可以被綠色熒光染料標(biāo)記,從而作為標(biāo)記物用于組織細(xì)胞培養(yǎng)、組織切片或無細(xì)胞系中的肌動蛋白標(biāo)記。被Acti-stainTM 488 phalloidin標(biāo)記的肌動蛋白絲其生物學(xué)特性未發(fā)生改變,包括與肌球蛋白結(jié)合的能力。
Acti-stainTM488 phalloidin呈橙色,固體,分子量1406。該化合物吸光度和熒光掃描顯示分別在500nm和550nm有一吸收峰和熒光峰。其1 x 工作液即可對300-350張蓋玻片的細(xì)胞進行染色。
注意:鬼筆環(huán)肽具有毒性,需小心操作(對人,其半數(shù)致死劑量為2mg/Kg)。
圖1 Acti-stainTM 488 Fluorescentphalloidin的吸光度和熒光掃描圖
說明:甲醇稀釋標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽,對其吸光度和激發(fā)光譜分別在250-750nm和500-750nm處掃描,吸收峰為500nm,熒光峰為550nm。
運輸與保存方法
冰袋(wet ice)運輸。使用前簡短離心使樣品至管底,加入500μl無水甲醇配制成14μM的溶液。該溶液可在-20℃穩(wěn)定保存6個月,凍干產(chǎn)物可以在4℃干燥環(huán)境(濕度<10%)下保存6個月。
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