中文名：ROS熒光探針-DHE

英文名：ROS fluorescent probe DHE

英文別名：Hydroethidine | 5-ethyl-6-phenyl-5,6-dihydrophenanthridine-3,8-diamine | Dihydroethidium | 5-ethyl-5,6-dihydro-6-phenyl-3,8-phenanthridinediamine | 5-ethyl-6-phenyl-6H-phenanthridine-3,8-diamine

貨號(hào)：R353922

包裝：1ml

Cas號(hào)：38483-26-0

存儲(chǔ)溫度：避光,-20°C儲(chǔ)存

產(chǎn)品介紹：

ROS 熒光探針-DHE

產(chǎn)品規(guī)格：1 mL(5 mM in DMSO)

產(chǎn)品參數(shù)

Ex/Em: 355/420 nm

CAS號(hào)：38483-26-0

分子式：C21H21N3

分子量：315

儲(chǔ)存條件

-20℃避光保存，有效期見外包裝。

產(chǎn)品介紹

DHE(Dihydroethidium)，可自由透過(guò)活細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞 內(nèi)，并被細(xì)胞內(nèi)的 ROS 氧化，形成氧化乙錠；氧化乙錠可 摻入染色體 DNA 中，產(chǎn)生紅色熒光。根據(jù)活細(xì)胞中紅色熒 光的產(chǎn)生，可以判斷細(xì)胞 ROS 含量的多少和變化。DHE 在 細(xì)胞內(nèi)主要被超氧陰離子型 ROS 氧化，用流式細(xì)胞儀或熒 光顯微鏡可直接觀察，是一種快速簡(jiǎn)便的組織或培養(yǎng)活細(xì)胞 中 ROS 經(jīng)典檢測(cè)方法。

使用說(shuō)明

1. 染色方法： （1）探針溶液可在新鮮培養(yǎng)液、緩沖鹽溶液或組織灌流液中稀釋到所需濃度，以此染色液更換細(xì)胞培養(yǎng)液或灌流液； 也可直接向細(xì)胞孵育液或灌流液中加入探針至所需濃度。 （2）依據(jù)細(xì)胞ROS含量的不同，DHE終濃度可選擇在1 μM~100 μM的范圍，孵育時(shí)間可選擇10~90 min。孵育可在 37℃或室溫進(jìn)行，要求避光。 （3）孵育結(jié)束后，用新鮮溶液清洗細(xì)胞或組織。 2. 熒光顯微照相操作方法： （1）對(duì)貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞或活組織，可直接在熒光顯微鏡下觀 察；對(duì)懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞，取25-50 μL細(xì)胞懸液滴到一張顯微載 玻片上，再蓋上一張蓋玻片。 （2）熒光顯微鏡下，用藍(lán)光或綠光激發(fā)，觀察和拍攝細(xì)胞 紅色發(fā)射圖像，ROS陽(yáng)性細(xì)胞在整個(gè)核區(qū)被染成紅色；用紫 外光激發(fā)時(shí)，胞漿中未氧化的DHE可發(fā)出藍(lán)色熒光。 3. 流式細(xì)胞分析操作方法： （1）對(duì)貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞，用胰酶消化制備成單細(xì)胞懸液；對(duì) 懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞，直接收集細(xì)胞。用0.5~1 mL冰冷PBS重懸細(xì) 胞(5~10萬(wàn))。 （2）采用 480~535 nm 波長(zhǎng)激發(fā)，測(cè)定 590 nm~610 nm 以 上的發(fā)射，細(xì)胞應(yīng)可分成兩個(gè)亞群：ROS 陰性細(xì)胞僅有很 低的熒光強(qiáng)度，ROS 陽(yáng)性細(xì)胞有較強(qiáng)的紅色熒光。

注意事項(xiàng)

1. DHE在光照和空氣中易被氧化，注意避光保存。 2. 該試劑可用于體外培養(yǎng)活細(xì)胞、培養(yǎng)或灌流組織及組織 冰凍切片的檢測(cè)。 3. 對(duì)不同的細(xì)胞和組織，應(yīng)選擇合適的孵育時(shí)間和濃度， 以觀察 ROS 的變化。

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