CY5-NHS酯; CY5 NHS ESTER，Cy5-SE

分子式：C37H43N3O10S2

分子量：753.88

溶解性：溶于水；DMSO

EX激發(fā)波長 646 nm

EM發(fā)射波長 664nm

用途：花菁染料Cy5，常被應用于生物分子標記，熒光成像及其他熒光生物分析。他們廣泛應用于多肽，蛋白，核苷酸等。Cy5染料具有增強熒光結合后的蛋白質。

儲存條件：避光 -20°C避光

運輸條件：2~8℃運輸

使用方法推薦（僅供參考）

水溶性Cy5 NHS標記 (D-ser2)-leucineenkephalin

1. Cy5 NHS 1.0 mg 溶解于400 μL DMSO后，加入到1mL 的玻璃瓶中盛有(D-ser2)-leucine-enkephalin acetate ( 0.75 mg) 的400 μL DMSO溶液。(Dye 和peptide 投料比是 1:1)

2. 然后加入15 μL三乙胺，常溫避光攪拌反應混合物過夜。

3. 用HPLC 純化蛋白，使用蛋白C18柱子(25 cm×10 mm)，每次上樣注入2×400 μL，30分鐘梯度洗脫

從0.1% TFA水溶液到MeCN∶H2O(0.1% TFA)=70∶30，流速4mL /min。(對不同的蛋白選擇不同的合適HPLC梯度流動相)

4. 收集適當?shù)纳珟Х澹瑯擞浂嚯牡谋Ａ魰r間比未標記的多肽長。

5. 產品冷凍干燥成粉末或在水溶液中，-20℃避光儲存;必要時可用質譜表征。

6.CyDye標記的蛋白穩(wěn)定性取決于蛋白本身。例如標記的IgG在4 ℃可避光保存2月;

更長期的保存需加入等體積的甘油-20 ℃避光保存。

F/P計算：

Cy5 在650 nm 的摩爾吸光系數(shù)為250 000 M-1 cm-1 ，所用蛋白在280 nm處的摩爾吸光系數(shù)為 170000 M-1 cm-1;

Cy5在280nm處的吸收是650nm處的5%。按以下公式計算F/P值。

[Cy5 dye] = (A650)/250 000

[peptide] =[A280 -(0.05×A650)]/170000

F/P final= [dye]/[peptide]= {0.68×A650}/ {A280 - (0.05×A650)}