ES/iPS 細(xì)胞凍存液
一、產(chǎn)品基本信息
產(chǎn)品名稱 | Applied Cell? ES/iPS 細(xì)胞凍存液 |
貨 號(hào) | AC-1001012 |
規(guī) 格 | 100mL |
運(yùn)輸保存條件 | 2-8 ℃ |
使用范圍 | 多能干細(xì)胞（ES/iPS）凍存 |
保質(zhì)期 | 24 個(gè)月 |
二、產(chǎn)品簡介
ES/iPS 細(xì)胞凍存液是埃澤思生物（Applied Cell?）自主開發(fā)的一款無血清、無需程序降溫的干細(xì)胞凍存液，適用于人多能干細(xì)胞（hES/hiPS）的凍存。本產(chǎn)品生產(chǎn)過程遵循 ISO9001 體系,并符合 GMP 指導(dǎo)原則。
三、產(chǎn)品特性
l 安全：無外源蛋白成分，大大降低各類病毒、霉菌和支原體等的污染風(fēng)險(xiǎn)。
l 穩(wěn)定：全程無血清生產(chǎn)，批次間差異小。
l 高效：凍存細(xì)胞復(fù)蘇率高于 90%。
l 簡單：即用型產(chǎn)品，且無需程序降溫可直接-80℃過夜后轉(zhuǎn)移至液氮中長期保存。
四、產(chǎn)品內(nèi)容
組分 | 規(guī)格 | 數(shù)量 | 運(yùn)輸 |
ES/iPS 細(xì)胞凍存液 ES/iPS Cryopreservation Medium | 100mL | 1 瓶 | 冰袋 |
五、相關(guān)產(chǎn)品
人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基（Applied Cell?: Cat. no.AC-1001000）
人多能干細(xì)胞消化液（Applied Cell?: Cat. no.AC-1001008）
無血清細(xì)胞凍存液（治療級(jí)）（Applied Cell?: AC-1001006）
即用型基質(zhì)膠（Applied Cell?: Cat. no. C-1001007）
六、細(xì)胞凍存操作方法
1. 準(zhǔn)備對(duì)數(shù)期生長的干細(xì)胞，加入人多能干細(xì)胞消化液（AC-1001008）消化 3~5 min，用 2mL
人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基（AC-1001000）制備成細(xì)胞懸液；
2. 1200 rpm 3min 離心，棄上清，用 1.5-2mL ES/iPS 細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞，細(xì)胞密度 1×106~1×107/mL；
3. 轉(zhuǎn)移至凍存管中，無需程序降溫，直接將待凍存細(xì)胞置于 -80℃過夜，后轉(zhuǎn)移至液氮中長期保存，凍存時(shí)注意直立放置凍存管；
七、細(xì)胞復(fù)蘇
1. 基質(zhì)膠包被培養(yǎng)板：取出 6 孔板/12 孔板，每孔內(nèi)加入 1 mL/0.5 mL 即用型基質(zhì)膠（AC-1001007）， 輕輕晃動(dòng) 6 孔板/12 孔板使基質(zhì)膠完全覆蓋皿底，置于 37℃培養(yǎng)箱中孵育 1h~2h，實(shí)驗(yàn)前拿出并置于超凈工作臺(tái)/生物安全柜中室溫下平衡 20min。如果暫時(shí)不用，可用 Parafilm 封口后 2-8℃ 儲(chǔ)存， 并于 1 周內(nèi)使用。
注意：①一支凍存的干細(xì)胞的數(shù)量在 1×106cells/mL 左右，對(duì)應(yīng) 6 孔板 1 孔；②即用型基質(zhì)膠對(duì)溫度敏感，即用即拿，用完后立即放回 4℃冰箱保存，且勿用手直接觸碰基質(zhì)膠液面所及的瓶身，影響基質(zhì)膠質(zhì)量。
2. 先將 2~3mL 的干細(xì)胞培養(yǎng)基加入 15mL 離心管中備用。
3. 解凍：將從液氮中取出的凍存管快速浸入 37℃溫水中，快速搖動(dòng)，使其在 1~2min 內(nèi)快速解凍； 注意：細(xì)胞從液氮中拿出的速度要快，盡量減少其暴露在室溫中的時(shí)間。
4. 離心：凍存管中的凍存液解凍后，將其逐滴加入含有干細(xì)胞培養(yǎng)基的 15mL 離心管中，將 15mL 離心管置于低速離心機(jī)中配比平衡后，1200 rpm 離心 3min；
5. 重懸：離心后棄上清加 1mL 人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基對(duì)干細(xì)胞沉淀進(jìn)行吹吸混勻，吹吸 3~5 次左右。
6. 接種：吹吸均勻后，將已經(jīng)平衡好的即用型基質(zhì)膠棄掉，將吹打均勻的干細(xì)胞懸液加入到已經(jīng)包被 好的 6 孔板中，并補(bǔ)全每孔 2mL 培養(yǎng)體系。
7. 培養(yǎng)：接種后的 6 孔板可以置于倒置相差顯微鏡下觀察接種的干細(xì)胞密度以及細(xì)胞團(tuán)塊大小，呈 4 個(gè)細(xì)胞以上的團(tuán)塊較合格，水平十字輕輕晃動(dòng) 6 孔板/12 孔板使細(xì)胞均勻分布。并置于 37℃，5% CO2 的恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，第 2 天觀察細(xì)胞貼壁情況；
八、細(xì)胞形態(tài)圖
九、質(zhì)量控制
檢驗(yàn)項(xiàng)目Test Catagories | 參考數(shù)據(jù)Reference Data |
外觀 Physical Appearance | 淡黃色液體 Pale Yellow Liquid |
澄清度Clarity | 澄清 Clear |
pH 值 pH Value | 6.6-7.2 |
滲透壓Osmolality | 1700-2400 （mosm/KgH2O） |
無菌 Sterility | 無菌 Sterility |
支原體Mycoplasma | 0.11um 過濾，支原體試驗(yàn)為陰性 The mycoplasma test was negative after 0.11um filtration |
細(xì)胞復(fù)蘇率 Cell Resuscitation Rate | 大于 85% More Than 95% |
關(guān)鍵字： 細(xì)胞凍存液;ES 細(xì)胞凍存液;iPS 細(xì)胞凍存液;
埃澤思生物總部位于上海，公司取名Applied Cell(應(yīng)用細(xì)胞)，是一家致力于為細(xì)胞治aize 療、再生埃澤思生物總部位于上海，公司取名AppliedCell(應(yīng)用細(xì)胞)，是一家致力于為細(xì)胞治療、再生醫(yī)學(xué)提供核心原料，以及研發(fā)服務(wù)（CRO ）和生物藥委托開發(fā)生產(chǎn)服務(wù)（CDMO）的生物科技公司。目前公司產(chǎn)品已經(jīng)涵蓋干細(xì)胞、免疫細(xì)胞治療全流程試劑原料。其中核心產(chǎn)品已經(jīng)完成美國FDADMF備案以及國家藥品評(píng)審中心（CDE）藥物原輔料備案，是國內(nèi)資質(zhì)最為齊全的細(xì)胞治療原料供應(yīng)商之一。目前，公司已與國內(nèi)6家細(xì)胞治療企業(yè)進(jìn)行細(xì)胞治療一類新藥聯(lián)合申報(bào)，一項(xiàng)日本一類新藥聯(lián)合申報(bào)。