HRP Blotting Atto ECL 為超靈敏的增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光底物，可用于高阿克級蛋白檢測。與 其他市售底物相比，可提供極高水平的靈敏度和極佳的信噪比。本產(chǎn)品用于在 Western Blot 中針對非常低豐度蛋白獲得卓越靈敏度和信噪比。 

目錄號 Art no: ECMA-0100/ 0500/ 1000 

包裝規(guī)格 Package size: 100mL/ 500mL/ 1000 mL 

試劑組分 Components: 

試劑 A: Art no: ECMA-A, 增強(qiáng)型魯米諾溶液 (Enhanced Luminol Solution) 

試劑 B: Art no: ECMA-B, 穩(wěn)定過氧化物溶液 (Stabilized Peroxide Solution) 

保質(zhì)期 Shelf life: 3 years 

儲(chǔ) 存 Storage: 2-8℃ 

應(yīng) 用 Application: 

Western Blot 按 1：1 預(yù)混后使用。 產(chǎn)品特點(diǎn) Characteristics: 

① 靈敏度高：低飛克級至高阿克級

② 穩(wěn)定性好：在 4°C 下，工作溶液達(dá) 48 小時(shí) 

③ 兼容性好：硝酸纖維素膜和 PVDF 膜 

④ 信號持續(xù)長：達(dá)六小時(shí) 

⑤ 一抗稀釋濃度：1:1000~1:5000 (質(zhì)量濃度：0.2~1.0 μg/mL) 

⑥ 二抗稀釋濃度：1:100000~1:250000 (質(zhì)量濃度：4~10 ng/mL) 

用法說明 Instruction: 

使用底物進(jìn)行 Western Blot 檢測： 

1.清洗膜 蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移后，將印跡膜轉(zhuǎn)印裝置中取出，用去離子水洗滌膜 5 分鐘，去除轉(zhuǎn)移緩沖液。

2. 封閉膜 用 DuraBlotTM Western Blot 封閉液 (如 1×酪蛋白封閉液、1×無蛋白封閉液)在室溫下?lián)u 晃封閉 30-60 分鐘?；蛘?，在 2~8℃下靜止封閉過夜。 

3. 孵育一抗 用一抗稀釋液（或封閉液）稀釋一抗?jié)舛戎?0.2-1μg/mL（或按照廠家推薦的稀釋度）， 在膜上搖動(dòng)孵育 1 小時(shí)，或?qū)⒂≯E在 2-8℃下孵育過夜。 

4. 洗滌膜 用洗滌液 TBST、PBST 或其他含有 0.05% Tween 20 的緩沖液清洗膜 10 分鐘，重復(fù)洗 滌 2 次。 

5. 孵育酶標(biāo)二抗 用酶標(biāo)二抗稀釋液稀釋酶標(biāo)二抗?jié)舛戎?4-10ng/mL 或 1:100000-1:250000（1mg/mL），在 室溫下?lián)u動(dòng)孵育印跡 30 分鐘至 1 小時(shí)。 

6. 清洗膜 用洗滌液清洗膜 6 次，每次 5 分鐘，以徹底去除任何未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。 

7. 準(zhǔn)備底物通過混合等量的底物 A 和穩(wěn)定的過氧化物 B 成分來制備底物工作液(如將 5 毫升增強(qiáng)型 魯米諾溶液與 5 毫升穩(wěn)定過氧化物溶液混合)。使用足夠體積的底物以確保印跡膜被底物完 全潤濕，并且印跡不會(huì)變干(0.1 mL/cm2 )。

8. 底物孵育 將膜與底物工作液孵育反應(yīng) 5 分鐘。 

9. 膜成像 

① 從工作溶液中取出印跡，并將其置于塑料保護(hù)套或透明塑料膜中；

② 用無塵吸水紙除去多余的液體，并小心地壓出印跡膜上的氣泡； 

③ 使用成像系統(tǒng)對印跡進(jìn)行成像。 注意：本產(chǎn)品用于檢測非常敏感，必須非常仔細(xì)的優(yōu)化單個(gè)分析成分(抗體，偶聯(lián)物等)，以 盡量減少非特異性反應(yīng)導(dǎo)致本底過高。