AP Blotting AMPPD ECL 是一種含 AMPPD 及增強(qiáng)劑的超靈敏堿性磷酸酶（AP）化學(xué)發(fā) 光底物，可直接用于硝酸纖維素膜（NC membrane）上的蛋白質(zhì)或核酸印跡。該底物與 AP 混合后，底物立即發(fā)生分解反應(yīng)釋放出光子，發(fā)光平臺(tái)期長(zhǎng)。本產(chǎn)品的低本底發(fā)光與高強(qiáng)度 光輸出相結(jié)合，能夠以盡可能高的靈敏度和信噪比檢測(cè)堿性磷酸酶標(biāo)記。AP Blotting AMPPD ECL 為熒光底物甲基傘形酮磷酸酯(MUP) 和比色底物 pNPP 提供了高度敏感的替代品，以 卓越的靈敏度、速度和簡(jiǎn)便性檢測(cè) AP 及其標(biāo)記的分子。

目錄號(hào) Art no: CLBM-0050/ 0100/ 0250 

包裝規(guī)格 Package size: 50mL/ 100mL/ 250 mL 

保質(zhì)期 Shelf life: 1.5 years 

儲(chǔ) 存 Storage: 2-8℃ 避光 應(yīng) 用 Application: Western blot / Northern blot 

用法說(shuō)明 Instruction: 

以膜面積為 100cm2 的 Western blot 為例： 

1.膜封閉：印跡膜轉(zhuǎn)移后，用 PBS 或 TBS 短暫沖洗印跡，然后在 10mL 封閉液中孵育 30- 60 分鐘；注：PBST 或 TBST 可用于洗滌 NC 膜或 PVDF 膜。對(duì)于尼龍膜，TBST 的背景比 PBST 略高。

2. 孵育一抗：在 5mL 封閉液中稀釋一抗至廠家推薦濃度，孵育 30-60 分鐘； 

3. 洗滌：對(duì)于 NC 膜和尼龍膜，在 20 mL 洗滌液（PBST/TBST）中洗滌至少 5 分鐘×3 次； 

4. 孵育二抗：在 5mL 封閉液中稀釋 AP 標(biāo)記的二抗至 1:50000，孵育 30-60 分鐘； 

5. 洗滌：與步驟 3 一樣洗滌 5 分鐘×3 次，然后用 20mM Tris (含 1mM MgCl2, pH9.8) 洗滌 膜 2 分鐘×2 次； 

6. 去除洗滌液：瀝干膜上的洗滌液，注意不要讓膜變干； 

7. 底物孵育：將 3mL 底物溶液加到印跡膜表面，孵育 5 分鐘； 

8. 去除底物液：瀝干底物溶液，并將膜放在顯影夾中或用塑料包裹，小心去除氣泡或褶皺； 9. 膜成像：建議初始曝光 5-30 分鐘，PVDF 或尼龍膜曝光時(shí)間膜通常比 NC 膜時(shí)間更短。