石斛多糖黃酮皂苷多糖多酚生物堿揮發(fā)油等提取樹脂純化成分分離定制及檢測

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更新日期	2024-08-27

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產品詳情

中文名稱:石斛黃酮皂苷多糖多酚生物堿揮發(fā)油	品牌: 普怡
產地: 南京	保存條件: 2-8℃
純度規(guī)格: 5%-90%	產品類別: 混合物
提取來源: 石斛	別名: 黃酮皂苷多糖多酚生物堿
執(zhí)行質量標準: 藥典	主要成分: 黃酮皂苷多糖多酚生物堿
用途: 科研	檢測方法: HPLC,UV
外觀: 粉末，浸膏	規(guī)格: 根基客戶需求包裝

本品為蘭科植物金釵石斛Dendrobium nobile Lindl.、霍山石斛Dendrobium huoshanense C.Z.Tang et S.J.Cheng、鼓槌石斛Dendrobium chrysotoxum Lindl.或流蘇石斛Dendrobium fimbriatum Hook.的栽培品及其同屬植物近似種的新鮮或干燥莖。全年均可采收，鮮用者除去根和泥沙；干用者采收后，除去雜質，用開水略燙或烘軟，再邊搓邊烘曬，至葉鞘搓凈，干燥?；羯绞?1月至翌年3月釆收，除去葉、根須及泥沙等雜質，洗凈，鮮用，或加熱除去葉鞘制成干條；或邊加熱邊扭成螺旋狀或彈簧狀，干燥，稱霍山石斛楓斗。

　　【性狀】鮮石斛呈圓柱形或扁圓柱形，長約30cm，直徑0.4～1.2cm。表面黃綠色，光滑或有縱紋，節(jié)明顯，色較深，節(jié)上有膜質葉鞘。肉質多汁，易折斷。氣微，味微苦而回甜，嚼之有黏性。

　　金釵石斛呈扁圓柱形，長20～40cm，直徑0.4～0.6cm，節(jié)間長2.5～3cm。表面金黃色或黃中帶綠色，有深縱溝。質硬而脆，斷面較平坦而疏松。氣微，味苦。

　　霍山石斛干條呈直條狀或不規(guī)則彎曲形，長2～8cm，直徑1～4mm。表面淡黃綠色至黃綠色，偶有黃褐色斑塊，有細縱紋，節(jié)明顯，節(jié)上有的可見殘留的灰白色膜質葉鞘；一端可見莖基部殘留的短須根或須根痕，另一端為莖尖，較細。質硬而脆，易折斷，斷面平坦，灰黃色至灰綠色，略角質狀。氣微，味淡，嚼之有黏性。鮮品稍肥大。肉質，易折斷，斷面淡黃綠色至深綠色。氣微，味淡，嚼之有黏性且少有渣。楓斗呈螺旋形或彈簧狀，通常為2～5個旋紋，莖拉直后性狀同干條。

　　鼓槌石斛呈粗紡錘形，中部直徑1～3cm，具3～7節(jié)。表面光滑，金黃色，有明顯凸起的棱。質輕而松脆，斷面海綿狀。氣微，味淡，嚼之有黏性。

　　流蘇石斛等呈長圓柱形，長20～150cm，直徑0.4～1.2cm，節(jié)明顯，節(jié)間長2～6cm。表面黃色至暗黃色，有深縱槽。質疏松，斷面平坦或呈纖維性。味淡或微苦，嚼之有黏性。

　　【鑒別】（1）本品橫切面：金釵石斛表皮細胞1列，扁平，外被鮮黃色角質層?；窘M織細胞大小較懸殊，有壁孔，散在多數外韌型維管束，排成7～8圈。維管束外側纖維束新月形或半圓形，其外側薄壁細胞有的含類圓形硅質塊，木質部有1～3個導管直徑較大。含草酸鈣針晶細胞多見于維管束旁。

　　霍山石斛表皮細胞1列，扁平，外壁及側壁稍增厚，微木化，外被黃色或橘黃色角質層，有的外層可見無色的薄壁細胞組成的葉鞘層?；颈”诮M織細胞多角形，大小相似，其間散在9～47個維管束，近維管束處薄壁細胞較小，維管束為有限外韌型，維管束鞘纖維群呈單帽狀，偶成雙帽狀，纖維1～2列，外側纖維直徑通常小于內側纖維，有的外側小型薄壁細胞中含有硅質塊。草酸鈣針晶束多見于近表皮處薄壁細胞或近表皮處維管束旁的薄壁細胞中。

　　鼓槌石斛表皮細胞扁平，外壁及側壁增厚，胞腔狹長形；角質層淡黃色?；窘M織細胞大小差異較顯著。多數外韌型維管束略排成10～12圈。木質部導管大小近似。有的可見含草酸鈣針晶束細胞。

　　流蘇石斛等表皮細胞扁圓形或類方形，壁增厚或不增厚?；窘M織細胞大小相近或有差異，散列多數外韌型維管束，略排成數圈。維管束外側纖維束新月形或呈帽狀，其外緣小細胞有的含硅質塊；內側纖維束無或有，有的內外側纖維束連接成鞘。有的薄壁細胞中含草酸鈣針晶束和淀粉粒。

　　粉末灰綠色或灰黃色。角質層碎片黃色；表皮細胞表面觀呈長多角形或類多角形，垂周壁連珠狀增厚。束鞘纖維成束或離散，長梭形或細長，壁較厚，紋孔稀少，周圍具排成縱行的含硅質塊的小細胞。木纖維細長，末端尖或鈍圓，壁稍厚。網紋導管、梯紋導管或具緣紋孔導管直徑12～50μm。草酸鈣針晶成束或散在。

　　（2）金釵石斛取本品（鮮品干燥后粉碎）粉末1g，加甲醇10ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液。另取石斛堿對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（通則0502）試驗，吸取供試品溶液20μl、對照品溶液5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）-丙酮（7:3）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以碘化鉍鉀試液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

　　霍山石斛取本品（鮮品干燥后粉碎）粉末（過二號篩）1g，加無水甲醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液回收溶劑至干，殘渣加水15ml使溶解，用石油醚（60～90℃）洗滌2次，每次20ml，棄去石油醚液，水液用乙酸乙酯洗滌2次，每次20ml，棄去乙酸乙酯液，用水飽和正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，回收溶劑至干，殘渣加無水甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取霍山石斛對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。再取夏佛塔苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（通則0502）試驗，吸取上述三種溶液各3～5μl，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以乙醇-丁酮-乙酰丙酮-水（4:4:1:17）為展開劑，20℃以下展開，取出，晾干，在105℃烘干，取出，噴以5%三氯化鋁乙醇溶液，在105℃加熱約3分鐘，取出，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。

　　鼓槌石斛取鼓槌石斛〔含量測定〕項下的續(xù)濾液25ml，回收溶劑至干，殘渣加甲醇5ml使溶解，作為供試品溶液。另取毛蘭素對照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（通則0502）試驗，吸取供試品溶液5～10μl、對照品溶液5μl，分別點于同一高效硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（3:2）為展開劑，展開，展距8cm，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

　　流蘇石斛等取本品（鮮品干燥后粉碎）粉末0.5g，加甲醇25ml，超聲處理45分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇5ml使溶解，作為供試品溶液。另取石斛酚對照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（通則0502）試驗，吸取上述供試品溶液5～10μl、對照品溶液5μl，分別點于同一高效硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（3:2）為展開劑，展開，展距8cm，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

　　（3）霍山石斛聚合酶鏈式反應-限制性內切酶長度多態(tài)性方法。

　　模板DNA提取取本品0.1g（鮮品干燥），加液氮適量研磨，過五號篩。取粉末25mg，置1.5ml離心管中，加入CTAB沉淀液［2%十六烷基三甲基溴化銨，100mmol/L Tris-鹽酸pH=8.0，10mmol/L乙二胺四乙酸二鈉］1000μl，渦旋震蕩，65℃水浴加熱20分鐘（中間震蕩混勻3次），離心（轉速為每分鐘12000轉）10分鐘，棄去上清液；再加入CTAB沉淀液1000μl，渦旋震蕩，65℃水浴加熱10分鐘，離心（轉速為每分鐘12000轉）10分鐘，棄去上清液；再同法操作一次；棄去上清液，加入CTAB提取液［2%十六烷基三甲基溴化銨，100mmol/L Tris-鹽酸pH=8.0，20mmol/L乙二胺四乙酸二鈉，2.5mol/L氯化鈉］900μl、蛋白酶K（20mg/ml）5μl充分混勻，65℃水浴加熱30分鐘，離心（轉速為每分鐘12000轉）10分鐘，吸取上清液置另一2.0ml離心管中；加入900μl三氯甲烷-異戊醇（體積比24：1）溶液，充分混勻，離心（轉速為每分鐘12000轉）10分鐘；取上清液，加入等體積三氯甲烷-異戊醇（體積比24：1）溶液（約800μl），充分混勻，離心（轉速為每分鐘12000轉）10分鐘；取上清液置另一2.0ml離心管中，加入2/3體積的異丙醇，置-20℃放置30分鐘；離心（轉速為每分鐘12000轉）10分鐘，棄去上清液；沉淀加70%乙醇500μl震蕩1分鐘，離心（轉速為每分鐘12000轉）3分鐘；棄去上清液，沉淀再用70%乙醇500μl震蕩1分鐘，離心（轉速為每分鐘12000轉）3分鐘；棄去上清液，置37℃水浴中揮干溶劑；加入高壓滅菌超純水50μl，溶解，作為供試品溶液，置4℃冰箱中備用。另取霍山石斛對照藥材0.1g，同法制成對照藥材模板DNA溶液。

　　PCR-RFLP反應鑒別引物：5'-ATTCTTCATCAAGTTTAGTGCATTC-3'和5'-AGAGCTGATGGGCCTTTGA-3'。PCR反應體系：在200μl離心管中進行，反應總體積為25μl，反應體系包括10×PCR緩沖液2.5μl，dNTP（10mmol/L）1μl，鑒別引物（10μmol/L）各0.2μl，Taq DNA聚合酶（5U/μl）0.2μl，10mg/ml牛血清蛋白1μl，25%聚乙烯吡咯烷酮1μl，模板1μl，無菌超純水18.4μl。將離心管置PCR儀，PCR反應參數：95℃預變性5分鐘，循環(huán)反應40次（95℃ 10秒，56℃ 20秒，72℃ 20秒），72℃延伸5分鐘。取PCR反應液，置200μl離心管中，進行酶切反應，反應總體積為20μl，反應體系包括10×酶切緩沖液2μl，PCR反應液17.5μl，AluⅠ內切酶（10U/μl）0.5μl，酶切反應在37℃水浴反應30分鐘。另取無菌超純水，同法上述PCR-RFLP反應操作，作為空白對照。

　　電泳檢測照瓊脂糖凝膠電泳法（通則0541），膠濃度為2.5%，膠中加入核酸凝膠染色劑GelRed；以DL500作為DNA分子量標記，供試品與對照藥材PCR產物和酶切反應產物的上樣量分別各8μl，DNA分子量標記上樣量為2μl（0.5μg/μl）。電泳結束后，取凝膠片在凝膠成像儀上或紫外透射儀上檢視?；羯绞┰嚻纺z電泳圖譜中，在與對照藥材凝膠電泳圖譜相應位置上，在100～200bp間應有單一DNA條帶，且PCR產物與酶切產物條帶位置一致。空白對照無條帶。

　　【特征圖譜】霍山石斛照高效液相色譜法（通則0512測定）。

　　色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-甲醇溶液（1:1）為流動相A，0.01mol/L乙酸銨溶液為流動相B，按下表中的規(guī)定進行梯度洗脫；流速為每分鐘0.8ml；柱溫40℃；檢測波長為340nm。理論板數按夏佛塔苷峰計算應不低于5000。

　　參照物溶液的制備取霍山石斛對照藥材約lg，加入甲醇50ml，超聲處理30分鐘（功率250W，頻率50kHz），取出，放冷，濾過，濾液濃縮至5ml，作為對照藥材參照物溶液。另取夏佛塔苷對照品加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，作為對照品參照物溶液，即得。

　　供試品溶液的制備取本品（鮮品干燥后粉碎）粉末（過三號篩）約1g，同對照藥材參照物溶液制備方法，制成供試品溶液，即得。

　　測定法分別精密吸取上述參照物溶液與供試品溶液各5～20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，即得。

　　供試品色譜中應呈現5個特征峰，并應與對照藥材參照物色譜峰中的5個特征峰保留時間相對應，其中峰1應與對照品參照物峰保留時間相對應。

　　【檢查】水分干石斛不得過12.0%（通則0832第二法）。

　　總灰分干石斛不得過5.0%（通則2302）。

　　霍山石斛不得過7.0%（通則2302）。

　　【浸出物】霍山石斛照醇溶性浸出物測定法（通則2201）項下的熱浸法測定，用乙醇作溶劑，干品不得少于8.0%。

　　【含量測定】金釵石斛照氣相色譜法（通則0521）測定。

　　色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 DB-1毛細管柱（100%二甲基聚硅氧烷為固定相）（柱長為30m，內徑為0.25mm，膜厚度為0.25μm），程序升溫：初始溫度為80℃，以每分鐘10℃的速率升溫至250℃，保持5分鐘；進樣口溫度為250℃，檢測器溫度為250℃。理論板數按石斛堿峰計算應不低于10000。

　　校正因子測定取萘對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含25μg的溶液，作為內標溶液。取石斛堿對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，作為對照品溶液。精密量取對照品溶液2ml，置5ml量瓶中，精密加入內標溶液1ml，加甲醇至刻度，搖勻，吸取1μl，注入氣相色譜儀，計算校正因子。

　　測定法取本品（鮮品干燥后粉碎）粉末（過三號篩）約0.25g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入0.05%甲酸的甲醇溶液25ml，稱定重量，加熱回流3小時，放冷，再稱定重量，用0.05%甲酸的甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液2ml，置5ml量瓶中，精密加入內標溶液1ml，加甲醇至刻度，搖勻，吸取1μl，注入氣相色譜儀，測定，即得。

　　本品按干燥品計算，含石斛堿（C16H25NO2）不得少于0.40%。

　　霍山石斛照紫外-可見分光光度法（通則0401）測定。

　　對照品溶液的制備取D-無水葡萄糖對照品適量，精密稱定，加水制成每1ml含100μg的溶液，即得。

　　標準曲線的制備精密量取對照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml，分別置10ml具塞試管中，各加水至1.0ml，精密加入5%苯酚溶液1ml（臨用配制），搖勻，再精密加硫酸5ml，搖勻，置沸水浴中加熱20分鐘，取出，置冰浴中冷卻5分鐘，以相應試劑為空白，照紫外-可見分光光度法（通則0401），在488nm的波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。

　　測定法取本品（鮮品干燥后粉碎）粉末（過三號篩）約0.4g，精密稱定，加水200ml，加熱回流2小時，放冷，轉移至250ml量瓶中，用少量水分次洗滌容器，洗液并入同一量瓶中，加水至刻度，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液2ml，置15ml離心管中，精密加入無水乙醇10ml，搖勻，冷藏1小時，取出，離心（轉速為每分鐘4000轉）20分鐘，棄去上清液，沉淀加80%乙醇洗滌2次，每次8ml，離心，棄去上清液，沉淀加熱水溶解，轉移至25ml量瓶中，放至室溫，加水至刻度，搖勻。精密量取供試品溶液1ml，置10ml具塞試管中，照標準曲線制備項下的方法，自“精密加入5%苯酚溶液1ml”起依法測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中D-無水葡萄糖的量，計算，即得。

　　本品按干燥品計算，含多糖以無水葡萄糖（C6H12O6）計，不得少于17.0%。

　　鼓槌石斛照高效液相色譜法（通則0512）測定。

　　色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.05%磷酸溶液（37:63）為流動相；檢測波長為230nm。理論板數按毛蘭素峰計算應不低于6000。

　　對照品溶液的制備取毛蘭素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含15μg的溶液，即得。

　　供試品溶液的制備取本品（鮮品干燥后粉碎）粉末（過三號篩）約lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，浸漬20分鐘，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）45分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

　　測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

　　本品按干燥品計算，含毛蘭素（C18H22O5）不得少于0.030%。

　　飲片

　　【炮制】干石斛除去殘根，洗凈，切段，干燥。霍山石斛除去雜質。

南京普怡生物科技有限公司專業(yè)從事天然產物、研發(fā)、生產、加工和銷售的外向型高科技現代化企業(yè)。公司成立十余年一直致力于天然產物的研究與開發(fā)，積累了大量的分離經驗。我們利用自身的研發(fā)經驗，反復對天然產物進行不同工藝分離，不同來源分離。針對每個品種制定合理及科學的分離流程、在植物有效成分化合物的研究、生產及植物有效成分化合物創(chuàng)新等方面有很豐富的技術儲備和經驗，并掌握著其理論原理和實施方法。更有效地著力于新品種的深度開發(fā)，拓展應用市場，推動植物有效成分化合物研發(fā)的產業(yè)化進程。

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目前擁有提取罐、濃縮器、層析柱，噴霧冷凍真空干燥等先進的生產設備。通過硅膠色譜，凝膠色譜，MCI,反相色譜等現代化分離手段，獲得了高純度的天然產物單體。研發(fā)部門配備有高效液相色譜、氣相色譜、紫外分光光度計、微生物檢測等先進檢測儀器。擁有先進的研發(fā)檢測中心，嚴格的生產工藝流程和完善的質量標準控制，保證產品的質量可靠和穩(wěn)定性。我們一直優(yōu)化及改善各個天然產物的分離工藝，努力降低分離成本，為最終用戶創(chuàng)造價值。配備全系列分離純化填料及多臺制備級HPLC，滿足于高純度中藥單體的中試放大及產業(yè)化需求；保證產品質量，可滿足醫(yī)藥、化工、保健品、食品、化妝品等行業(yè)不同客戶的需求。

我公司與國內外優(yōu)質原料供應商和科研機構密切合作，選取優(yōu)質原料，采用現代科技進行生產加工，以保證我們提供的產品具有更好的品質。我們深知，不斷推出高質量產品對于企業(yè)的持續(xù)穩(wěn)定發(fā)展至關重要。

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關鍵字：石斛黃酮;石斛皂苷;石斛多糖;石斛物堿;石斛發(fā)油;

公司簡介

南京普怡生物是一家專業(yè)致力于天然藥用植物活性成分的研究、開發(fā)、生產公司。公司依托南京中醫(yī)藥大學，中國藥科大學等國內知名高校建立了長期的戰(zhàn)略合作伙伴關系，校企聯(lián)合，產學結合，實現了優(yōu)勢互補與資源共享。公司的天然產物提取廠生產線配備有提取，濃縮，柱層析，精制分離，烘干和噴霧干燥等全套設備，能夠根據客戶和市場需求生產，工廠根據GMP要求實施生產管理，確保了生產工藝的穩(wěn)定性和產品的標準化及安全性。公司質量控制中心配有進口高效液相色譜儀-蒸發(fā)光散射檢測器(HPLC-ELSD)、原子熒光光度計(AFS)、紫外-可見分光光度計(UV)、微生物檢測設備、快速水分測定儀等全套檢測設備，全面控制產品含量、重金屬、微量元素、微生物等各項

成立日期	2005-08-20 （20年）	注冊資本	1000萬
員工人數	100-500人	年營業(yè)額	￥ 1000萬-5000萬
主營行業(yè)	香精和香料中間體,植物提取物,高純試劑,原料藥,中草藥提取物	經營模式	工廠,試劑,定制,服務

南京普怡生物科技有限公司

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公司成立：20年
注冊資本：1000萬
企業(yè)類型：專業(yè)中藥分離萃取廠家
主營產品：中藥單體和混合物：龍膽苦苷，神經酸，柴胡總皂苷，梓醇，丹酚酸B
公司地址：浦口國家級高新技術開發(fā)區(qū)

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