InChI

InChI=1S/C24H25N5O.2ClH/c1-2-12-28(13-3-1)14-15-30-22-6-4-19(5-7-22)21-16-26-24-23(17-27-29(24)18-21)20-8-10-25-11-9-20;;/h4-11,16-18H,1-3,12-15H2;2*1H

儲(chǔ)存條件

Powder : 2-8℃, 2 years; In solvent(母液): -20℃, 1 month; -80℃, 6 months

描述

Dorsomorphin Dihydrochloride是一種有效,選擇性和 ATP 競爭性的 AMPK 抑制劑。(Dorsomorphin Dihydrochloride is a potent, selective and ATP-competitive AMPK inhibitor.)

分子式

C₂₄H₂₅N₅O·2HCl

生物活性

Dorsomorphin dihydrochloride是一種有效，選擇性和 ATP 競爭性的 AMPK 抑制劑，Ki 為109±16 nM。[1-4]

SMILES

[H]Cl.[H]Cl.C12=C(C3=CC=NC=C3)C=NN1C=C(C4=CC=C(OCCN5CCCCC5)C=C4)C=N2

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

小鼠[3]在標(biāo)準(zhǔn)飲食中飼養(yǎng)的12周齡C57BL / 6小鼠通過尾靜脈注射0.2g / kg葡聚糖或0.2g / kg鐵 - 葡聚糖USP。葡聚糖僅注射載體, 而鐵 - 葡聚糖注射載體或Dorsomorphin (10mg / kg) 。注射后1小時(shí), 殺死小鼠并將肝臟片段收集在500μLSDS-裂解緩沖液中并機(jī)械均化。通過SDS-PAGE分離20μL肝臟提取物并進(jìn)行免疫印跡。使用來自機(jī)械均質(zhì)化的小鼠肝臟的Trizol收獲總RNA (注射后6小時(shí), 單次腹膜內(nèi)劑量的Dorsomorphin (10mg / kg) 或DMSO) 。

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

在存在或不存在10mM 2DG或1μg/ mL衣霉素作為應(yīng)激源的情況下, 用不同濃度的Dorsomorphin (0, 0.3, 1, 3, 10μM) , Versipelostatin和苯乙雙胍處理HeLa和786-O細(xì)胞。 h在96孔板中。對(duì)于組合研究, 在存在或不存在10mM 2DG的情況下, 用各種濃度的UPR抑制劑處理786-O細(xì)胞24小時(shí)。然后用新鮮生長培養(yǎng)基替換培養(yǎng)基, 并將細(xì)胞再培養(yǎng)15小時(shí)。隨后, 將MTT添加到培養(yǎng)基中, 并確定每個(gè)孔的吸光度。對(duì)于在葡萄糖戒斷條件下的活力測定, 在存在或不存在葡萄糖的情況下, 在12孔板中用不同濃度的Dorsomorphin和苯乙雙胍處理HT1080細(xì)胞18小時(shí), 接種在96孔板中的生長培養(yǎng)基中, 然后培養(yǎng)。再添加MTT前48小時(shí)。通過將來自未處理細(xì)胞的每個(gè)對(duì)照吸光度設(shè)定為100％來計(jì)算相對(duì)細(xì)胞存活率 (一式四份測定的平均值±SD) 。使用等效線法[2]分析藥物組合在產(chǎn)生80％細(xì)胞生長抑制 (IC80) 的濃度下的作用。

激酶實(shí)驗(yàn)

將HT1080細(xì)胞接種在24孔板 (每孔2×10 4個(gè)細(xì)胞) 中, 并在存在或不存在葡萄糖或10mM 2DG的情況下用Dorsomorphin處理2小時(shí)。通過在6孔板中轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA (pAMPKα1-wt, pAMPKα1-D168A和pcFlag作為對(duì)照) , 在24孔板中接種并用UPR抑制劑處理來制備過表達(dá)野生型和顯性失活A(yù)MPKα1的HT1080細(xì)胞。用細(xì)胞裂解緩沖液 (20mM Tris-HCl, pH 7.5, 250mM NaCl, 10％甘油, 0.5％NP-40, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 0.2mM PMSF, 1μg/ mL胃蛋白酶抑制劑, 0.5) 裂解細(xì)胞。 μg/ mL亮抑酶肽, 5mM NaF, 2mM Na 3 Vo4, 2mMβ-甘油磷酸鹽, 1mM DTT) 。使用CycLex AMPK激酶測定試劑盒[2]測定對(duì)照樣品 (在正常生長條件下的載體或pcFlag) 的相對(duì)AMPK激酶活性 (重復(fù)測定的平均值±SD) 。

In Vivo

在24小時(shí)內(nèi)施用Dorsomorphin導(dǎo)致總血清鐵濃度增加60％。因此, Dorsomorphin治療可有效降低成人小鼠鐵調(diào)素表達(dá)的基礎(chǔ)水平并增加血清鐵濃度[3]。

In Vitro

在2DG應(yīng)力下, 用10μMDorsomorphin處理HT1080細(xì)胞2小時(shí)。免疫印跡分析顯示, 通過將HT1080細(xì)胞暴露于2DG, AMPK的催化α亞基的磷酸化水平增加, 而當(dāng)添加Dorsomorphin時(shí), 基礎(chǔ)和2DG誘導(dǎo)的磷酸化水平明顯降低。使用基于ELISA的測定系統(tǒng)測量細(xì)胞激酶活性證實(shí), 無論細(xì)胞培養(yǎng)條件如何, Dorsomorphin都會(huì)降低內(nèi)源性AMPK活性[2]。

Note

以上數(shù)據(jù)均來自公開文獻(xiàn), Solarbio暫未進(jìn)行獨(dú)立驗(yàn)證, 僅供參考。These protocols are for reference only. Solarbio does not independently validate these methods.

數(shù)據(jù)來源文獻(xiàn)

[1]. Zhou G, et al. Role of AMP-activated protein kinase in mechanism of metformin action. J Clin Invest. 2001 Oct; 108 (8) :1167-74. [2]. Saito S, et al. Compound C prevents the unfolded protein response during glucose deprivation through a mechanism independent of AMPK and BMP signaling. PLoS One. 2012; 7 (9) :e45845. [3]. Yu PB, et al. Dorsomorphin inhibits BMP signals required for embryogenesis and iron metabolism. Nat Chem Biol. 2008 Jan; 4 (1) :33-41. [4]. Zhang DY, et al. Role of autophagy and its molecular mechanisms in mice intestinal tract after severe burn. J Trauma Acute Care Surg. 2017 Oct; 83 (4) :716-724