品牌：meilunstar

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：染料 DiD, DiI, DiO 和 DiR 是一類親脂性熒光染料家族，用于標(biāo)記細(xì)胞膜和疏水性組織。這是一類環(huán)境敏感型熒光染料，當(dāng)它們與膜結(jié)合或者與親脂性生物分子（例如蛋白質(zhì)，雖然在水中其熒光強(qiáng)度很弱）結(jié)合時(shí)，其熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)。它們具有很高的淬滅系數(shù)，偏光依賴性和很短的激發(fā)壽命。一旦應(yīng)用于細(xì)胞中，這種染料會(huì)在細(xì)胞內(nèi)質(zhì)膜中逐步擴(kuò)散，導(dǎo)致在其濃度條件下，將整個(gè)細(xì)胞膜染色。它們不同的熒光顏色：DiI（橙色熒光）、DiO（綠色熒光）、DiD（紅色熒光）、DiR（深紅色熒光），為活細(xì)胞多色彩熒光成像分析和流式細(xì)胞術(shù)提供了一種便捷的工具。
DiD（紅色熒光）可以用來(lái)對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行成像和流式分析。DiD可以用633 nm He–Ne 激光器激發(fā)，有著比 DiI 更長(zhǎng)的激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)，在細(xì)胞和組織染色中更有價(jià)值。
基本信息：

產(chǎn)品應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)實(shí)測(cè)：（由美侖細(xì)胞生物學(xué)項(xiàng)目組獨(dú)立完成）
本品配成 5mM 溶液后為深藍(lán)色液體溶液澄清度且顏色檢測(cè)無(wú)可見(jiàn)異物；然后進(jìn)行熒光染色檢測(cè)：工作條件：熒光顯微鏡，C6 細(xì)胞，400×，工作濃度 5μM。
結(jié)果：經(jīng)細(xì)胞膜熒光染色，在40倍物鏡下可看到清晰熒光。此濃度下在熒光顯微鏡下看到的熒光亮度亦足以用于共聚焦檢測(cè)。

儲(chǔ)存條件：-20℃，避光防潮密閉干燥

運(yùn)輸條件：2~8℃運(yùn)輸

操作說(shuō)明（僅供參考） 

1. 染色液制備

（1）配置DMSO或EtOH 儲(chǔ)存液：儲(chǔ)存液用 DMSO或EtOH配置濃度1～5 mM。
【注】未使用的儲(chǔ)存液分裝儲(chǔ)存在-20℃，避免反復(fù)凍融。
（2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無(wú)血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲(chǔ)存液，配制濃度為1～5 μM的工作液。
【注】工作液最終濃度建議根據(jù)不同細(xì)胞系和實(shí)驗(yàn)體系來(lái)優(yōu)化。建議從推薦濃度的10倍范圍內(nèi)開(kāi)始濃度的摸索。

1. 懸浮細(xì)胞染色

（1）加入適當(dāng)體積的染色工作液重懸細(xì)胞，使其密度為1×106/mL。
（2）37 ℃孵育細(xì)胞 2～20min，不同的細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間不同。可以20min作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記結(jié)果。
（3）孵育結(jié)束，按1000～1500 rpm離心5min。
（4）傾倒上清液，再次緩慢加入37℃預(yù)熱的生長(zhǎng)培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。
（5）重復(fù)（3），（4）步驟兩次以上。
3. 貼壁細(xì)胞的染色 
（1）將貼壁細(xì)胞培養(yǎng)于無(wú)菌蓋玻片上。
（2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過(guò)量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。
（3）在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動(dòng)使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。
（4）37 ℃孵育細(xì)胞 2～20min，不同的細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間不同。可以20min作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記結(jié)果。
（5）吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，孵育5～10min，然后吸干培養(yǎng)基。
4. 顯微鏡檢測(cè)
DiD，DiO，DiI，DiR濾光器的選擇參見(jiàn)表1。 DiD染色可見(jiàn)紅色熒光。
5.流式細(xì)胞儀檢測(cè)
DiO、DiI、DiD、DiR染色的細(xì)胞可以分別用經(jīng)典的FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3和FL4流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

表1. 細(xì)胞膜熒光探針相關(guān)產(chǎn)品