品牌:meilunstar
產(chǎn)品簡介:染料 DiD, DiI, DiO 和 DiR 是一類親脂性熒光染料家族,用于標記細胞膜和疏水性組織。這是一類環(huán)境敏感型熒光染料,當它們與膜結(jié)合或者與親脂性生物分子(例如蛋白質(zhì),雖然在水中其熒光強度很弱)結(jié)合時,其熒光強度顯著增強。它們具有很高的淬滅系數(shù),偏光依賴性和很短的激發(fā)壽命。一旦應(yīng)用于細胞中,這種染料會在細胞內(nèi)質(zhì)膜中逐步擴散,導致在其濃度條件下,將整個細胞膜染色。它們不同的熒光顏色:DiI(橙色熒光)、DiO(綠色熒光)、DiD(紅色熒光)、DiR(深紅色熒光),為活細胞多色彩熒光成像分析和流式細胞術(shù)提供了一種便捷的工具。DiD(紅色熒光)可以用來對活細胞進行成像和流式分析。DiD可以用633 nm He–Ne 激光器激發(fā),有著比 DiI 更長的激發(fā)波長和發(fā)射波長,在細胞和組織染色中更有價值。基本信息:
10mg
產(chǎn)品形式
粉末
Ex (nm)
644
Em (nm)
663
分子量
959.91
溶劑
DMSO
產(chǎn)品應(yīng)用標準實測:(由美侖細胞生物學項目組獨立完成)本品配成 5mM 溶液后為深藍色液體溶液澄清度且顏色檢測無可見異物;然后進行熒光染色檢測:工作條件:熒光顯微鏡,C6 細胞,400×,工作濃度 5μM。結(jié)果:經(jīng)細胞膜熒光染色,在40倍物鏡下可看到清晰熒光。此濃度下在熒光顯微鏡下看到的熒光亮度亦足以用于共聚焦檢測。
儲存條件:-20℃,避光防潮密閉干燥
運輸條件:2~8℃運輸
操作說明(僅供參考)
染色液制備
(1)配置DMSO或EtOH 儲存液:儲存液用 DMSO或EtOH配置濃度1~5 mM。【注】未使用的儲存液分裝儲存在-20℃,避免反復凍融。(2)工作液制備:用合適的緩沖液(如:無血清培養(yǎng)基,HBSS或PBS)稀釋儲存液,配制濃度為1~5 μM的工作液。【注】工作液最終濃度建議根據(jù)不同細胞系和實驗體系來優(yōu)化。建議從推薦濃度的10倍范圍內(nèi)開始濃度的摸索。
懸浮細胞染色
(1)加入適當體積的染色工作液重懸細胞,使其密度為1×106/mL。(2)37 ℃孵育細胞 2~20min,不同的細胞培養(yǎng)時間不同。可以20min作為起始孵育時間,之后優(yōu)化體系以得到均一的標記結(jié)果。(3)孵育結(jié)束,按1000~1500 rpm離心5min。(4)傾倒上清液,再次緩慢加入37℃預(yù)熱的生長培養(yǎng)液重懸細胞。(5)重復(3),(4)步驟兩次以上。3. 貼壁細胞的染色 (1)將貼壁細胞培養(yǎng)于無菌蓋玻片上。(2)從培養(yǎng)基中移走蓋玻片,吸走過量培養(yǎng)液,將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。(3)在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液,輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。(4)37 ℃孵育細胞 2~20min,不同的細胞培養(yǎng)時間不同??梢?0min作為起始孵育時間,之后優(yōu)化體系以得到均一的標記結(jié)果。(5)吸干染料工作液,用培養(yǎng)液洗蓋玻片2~3次,每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細胞,孵育5~10min,然后吸干培養(yǎng)基。4. 顯微鏡檢測DiD,DiO,DiI,DiR濾光器的選擇參見表1。 DiD染色可見紅色熒光。5.流式細胞儀檢測DiO、DiI、DiD、DiR染色的細胞可以分別用經(jīng)典的FL1,F(xiàn)L2,F(xiàn)L3和FL4流式細胞儀檢測。
表1. 細胞膜熒光探針相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品名稱
Ex/Em
推薦濾光器
MB6190
DiD 細胞膜熒光探針紅色
644/663 nm
XF47-Omega, 31023-Chroma
MB4240
DiI細胞膜熒光探針橙紅色
933.87
550/567 nm
XF32-Omega, 31002-Chroma
MB4239
DiO細胞膜熒光探針綠色
881.7
484/501 nm
XF23-Omega, 31001-Chroma
MB12482
DiR細胞膜熒光探針深紅色;DiR碘化物
1013.39
748/780 nm
XF112-Omega,41009-Chroma
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