碧云天生產(chǎn)的BJ5183-AD-1超級(jí)感受態(tài)細(xì)胞,英文名BJ5183-AD-1 Super Competent Cells,是一種可以用于腺病毒系統(tǒng)質(zhì)??寺〔⒕哂休^高重組能力的E. coli BJ5183-AD-1即用型化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞。使用PCAMBIA2301質(zhì)粒進(jìn)行熱激活轉(zhuǎn)化,轉(zhuǎn)化效率可以高達(dá)1×105cfu/μg DNA以上。
BJ5183-AD-1中攜帶pAdEasy-1質(zhì)粒,其包含大部分人腺病毒5型的基因組序列(E1/E3基因缺失),表達(dá)供pAdEasy-1骨架質(zhì)粒和pAdEasy穿梭質(zhì)粒進(jìn)行同源重組的所有組分,形成重組腺病毒質(zhì)粒。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可直接轉(zhuǎn)入線性化的攜帶目的基因的穿梭質(zhì)粒,從而簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)步驟,并提高腺病毒質(zhì)粒重組效率。
BJ5183-AD-1菌株的基因型為endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR (StrR)[pAdEasy-1 (AmpR)]。其中sbcBC和recBC的雙重突變,賦予其較強(qiáng)的重組能力,有利于轉(zhuǎn)入的目的基因與腺病毒骨架質(zhì)粒的重組[1];recA1可減少插入片段的同源重組概率,保證了插入DNA的穩(wěn)定性;StrR使得該細(xì)胞具有硫酸鏈霉素抗性;pAdeasy-1使其具有氨芐抗性,一旦與穿梭載體重組,抗性消失。
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