碧云天生產(chǎn)的農(nóng)桿菌感受態(tài)制備試劑盒(Agrobacterium Competent Cells Preparation Kit)，是一種專門用于農(nóng)桿菌感受態(tài)快速制備的試劑盒。農(nóng)桿菌經(jīng)過本試劑盒處理后，細(xì)胞膜的通透性發(fā)生了暫時(shí)性的改變，成為能允許外源DNA分子進(jìn)入的感受態(tài)細(xì)胞。

農(nóng)桿菌常生活在植物根表面，依靠由根組織滲透出來的營養(yǎng)物質(zhì)生存，是一類廣泛存在于土壤中的革蘭氏陰性細(xì)菌，常用于基因過表達(dá)、敲除、敲減和編輯等轉(zhuǎn)基因植物的構(gòu)建。根瘤農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒上的T-DNA上有8個(gè)左右的基因在植物細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，指導(dǎo)合成一種特殊化合物冠癭堿，引起轉(zhuǎn)化細(xì)胞癌變;而發(fā)根農(nóng)桿菌的Ri質(zhì)粒同樣含有T-DNA,可誘導(dǎo)產(chǎn)生發(fā)狀根，其特征是大量增生高度分支的根系。

本試劑盒適用于絕大多數(shù)常見的農(nóng)桿菌，如GV3101、EHA101、LBA4404和EHA105等根瘤農(nóng)桿菌(Agrobacterium tumefaciens)或C58C1和Ar.1193等發(fā)根農(nóng)桿菌(Agrobacterium rhizogenes)感受態(tài)細(xì)胞的制備。使用本試劑盒可以使感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率達(dá)到10³-10⁴cfu/μg質(zhì)粒。但是不同種類農(nóng)桿菌菌種制備出來的感受態(tài)細(xì)胞，轉(zhuǎn)化效率可能有較大差異。此外，對(duì)于較小的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化效率會(huì)略高，而對(duì)于較大的質(zhì)粒則轉(zhuǎn)化效率會(huì)略低一些。

本試劑盒操作簡單，細(xì)菌培養(yǎng)后僅需1個(gè)小時(shí)左右即可完成感受態(tài)細(xì)胞的制備。

本試劑盒提供了專門用于制備農(nóng)桿菌感受態(tài)的培養(yǎng)液，使感受態(tài)的制備更加便捷。

使用碧云天生產(chǎn)的農(nóng)桿菌感受態(tài)制備試劑盒制備的農(nóng)桿菌感受態(tài)轉(zhuǎn)化效果參考圖1。

圖1. 使用碧云天農(nóng)桿菌感受態(tài)制備試劑盒制備的農(nóng)桿菌感受態(tài)轉(zhuǎn)化效果圖。使用本試劑盒制備的感受態(tài)在液氮中速凍后保存在-80℃。取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)放置于室溫片刻，待其部分融化，處于冰水混合狀態(tài)時(shí)插入冰浴中。每100 μl感受態(tài)細(xì)胞加入0.1μg質(zhì)粒DNA，用手撥打管底混勻，依次于冰上靜置15min、液氮1-3min、37℃水浴3-5min。 然后在超凈臺(tái)中加入500 μl無抗生素的LB或YEB液體培養(yǎng)基，28℃振蕩培養(yǎng)2h。4000×g離心1min收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸農(nóng)桿菌沉淀，涂布于含相應(yīng)抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28-30℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天。GV3101轉(zhuǎn)化效果見圖1A(轉(zhuǎn)化效率約為3×10³ CFU/μg質(zhì)粒)，LBA4404轉(zhuǎn)化效果見圖1B(轉(zhuǎn)化效率約為1.5×10³ CFU/μg質(zhì)粒)，EHA101轉(zhuǎn)化效果見圖1C(1×10⁴ CFU/μg質(zhì)粒)。本產(chǎn)品的實(shí)際使用效果會(huì)因具體實(shí)驗(yàn)條件、實(shí)驗(yàn)材料等的不同而存在差異，圖中效果僅供參考。

本試劑盒可以分多次使用，共可以制備足夠進(jìn)行100次轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞。