碧云天生產(chǎn)的Recombinant Proteinase K (重組蛋白酶K)，是一種不含動(dòng)物源性物質(zhì)的(animal origin-free, AOF)的蛋白酶K，通過畢赤酵母(Pichia pastoris)發(fā)酵并純化獲得。
Proteinase K，也稱protease K或endopeptidase K，中文名為蛋白酶K或肽鏈內(nèi)切酶，CAS號(hào)為39450-01-6，屬于一種廣譜的絲氨酸蛋白酶，可被某些絲氨酸蛋白酶的抑制劑如PMSF、AEBSF等所抑制。蛋白酶K無明顯的切割特異性，能在脂肪族、芳香族或疏水性氨基酸的羧基側(cè)裂解肽鍵，可被蛋白酶K水解的最小的肽是四肽。蛋白酶K對(duì)天然蛋白質(zhì)的酶切降解非常有效，因此常用于在核酸分離過程中快速滅活內(nèi)源RNA酶、DNA酶等核酸酶，并消化核酸結(jié)合蛋白等。本重組蛋白酶K的基因序列來源于林伯氏白色念球菌(Tritirachium album Limber)的蛋白酶K基因。
本重組蛋白酶K應(yīng)用廣泛。用于各種常見的分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)等相關(guān)實(shí)驗(yàn)時(shí)消化各種蛋白，例如基因組DNA抽提、酶的消化去除、制備原位雜交組織切片、提高PCR產(chǎn)物的克隆效率等。
本蛋白酶K不含DNase，不含RNase，無核酸殘留。
本重組蛋白酶K穩(wěn)定性好。本重組蛋白酶K酶粉末在-20℃保存一年，酶活下降不超過2%；在25℃保存4個(gè)月，酶活下降均不超過4%。
本重組蛋白酶K活性高、純度高。本重組蛋白酶K酶活力≥30U/mg，純度≥95% (電泳)，分子量約為28.9kDa。在pH7.5、37℃，以血紅蛋白為底物，1分鐘內(nèi)可以產(chǎn)生相當(dāng)于1微摩爾酪氨酸Folin陽性的氨基酸或多肽的蛋白酶K的量，定義為一個(gè)單位蛋白酶K酶活力。
本重組蛋白酶K在很寬的pH范圍內(nèi)有效。有效的pH范圍為pH4.0-12.5，pH范圍為pH7.5-8.0。
本重組蛋白酶K的反應(yīng)溫度為65℃，但在65℃或更高溫度時(shí)，蛋白酶K自身也會(huì)非常迅速地降解。很多時(shí)候反應(yīng)溫度選擇50-55℃。
在0.2-1% SDS或約10mM尿素存在的情況下，蛋白酶K顯示更高的酶活性。蛋白酶K的常用工作濃度為0.05-1mg/ml，根據(jù)所用緩沖液是否含有SDS、尿素、pH是否適合、溫度是否適合等因素確定具體的工作濃度。
常用濃度的EDTA、Triton X-100、Tween 20、Sarkosyl、鹽酸胍對(duì)蛋白酶K的活力影響不大。
關(guān)鍵字： 重組蛋白酶K;protease K;
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