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通用型PCR試劑盒
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通用型PCR試劑盒

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發(fā)貨地 上海
更新日期 2024-12-24
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產(chǎn)品詳情

中文名稱:通用型PCR試劑盒品牌: 一研
產(chǎn)地: 國產(chǎn)保存條件: 2-8℃
產(chǎn)品類別: PCR試劑盒
規(guī)格: 50T
2024-12-24 通用型PCR試劑盒 1盒/RMB 一研 國產(chǎn) 2-8℃ PCR試劑盒

通用型PCR試劑盒試劑盒組份:

表 1:試劑盒組份

 

試劑

裝量

貯存條

CHO control DNA

40ul×1 

-20oC

DNA dilution buffer

6ml ×1 

-20oC

2×Taqman master mix (+UNG/ROX)

0.75ml ×2 

-20oC

10×CHO qPCR mix

0.3ml ×1 

-20oC

RNase-Free H2O

1.5ml×1 

-20oC

規(guī)格 :100  反應(yīng)

用機型:

PRISM 7500 Real-Time PCR System (ABI)

StepOne Plus Real-Time PCR System (ABI)

LightCycler 480 (Roche)

AriaMX (Agilent Technologies)

CFX (BIO-RAD)

 

驗所需但試劑盒未包含材料:

 

? 1.5ml 無菌低吸附離心管

? 96 孔 qPCR  

一次性手

1000ul 、100ul 、10ul 無菌低吸附帶濾芯移液槍頭

 

關(guān)設(shè)備:

?  離心機

渦旋振蕩

? 熒光定量 PCR 

? 1000ul 、100ul 10ul 移液器

實驗操作過程:

 

一、 CHO DNA 定量參考品的稀釋及標準曲線的制備

用試劑盒中供的 DNA dilution buffer 將 CHO control DNA 進行梯度稀釋, 稀釋濃度依 次為 300pg/ul 、30pg/ul 、3pg/ul 、300fg/ul 、30fg/ul 、3fg/ul 。具體操作如下:

1.將試劑盒中的 CHO control DNA 和 DNA dilution buffer 置于冰上融化,待完全融化后,

振蕩混勻,簡短快速離心。

2.取 支干凈的 1.5ml 離心管,分別標記為 SD1 ,SD2 ,SD3 ,SD4 ,SD5, SD6

3,SD管中加入 198ul DNA dilution buffer,其余管中分別加入 180ul DNA dilution buffer

4,取 2ul  CHO  control  DNA 加入 SD管中,  然后渦旋振蕩混勻 5- 10s 后短時快速離心 5s,渦旋振蕩和快速離心各重復 次。

5,按表 依次行 次梯度稀釋操作,稀釋操作同步驟 4

 2. CHO control DNA 的稀釋

釋管

釋體積

濃度

SD1

2ul CHO control DNA+198ul DNA dilution buffer

300 pg/ul

SD2

20ul SD1+180ul DNA dilution buffer

30 pg/ul

SD3

20ul SD2+180ul DNA dilution buffer

pg/ul

SD4

20ul SD3+180ul DNA dilution buffer

300 fg/ul

SD5

20ul SD4+180ul DNA dilution buffer

3fg/ul

SD6

20ul SD5+180ul DNA dilution buffer

3 fg/ul

、加樣回收質(zhì)控 ERC 的制備

根據(jù)待測樣本的殘留量設(shè)置 ERC 中 CHO  control  DNA 的加樣濃度  (以制備加 45pg  CHO control DNA 的樣本 ERC 為例),操作如下:

1,取待測樣本 100u,加至 1.5ml 凈的離心管中;

2,加入 1.5ul SD2,混勻,標記為樣本 ERC。

:樣本 ERC 和同批待測樣本需一起進行樣本前處理。

三、陰性質(zhì)控 NEG 的制備

據(jù)實驗設(shè)置陰性質(zhì)控,操作如下:

1,取 100ul 樣本基質(zhì)溶液(或洗脫液)加至 1.5ml 干凈的離心管中標記為陰性質(zhì)控 NEG 注:陰性質(zhì)控 NEG 樣本和同批待測樣本需一起進行樣本前處理。

四、 qPCR 反應(yīng)液的制備和加樣

1,根據(jù)所要檢測的標準曲線及待測樣本數(shù)量,計算所需反應(yīng)孔數(shù),一般做 個重復孔/樣。

反應(yīng)孔數(shù)=  (個濃度梯度+1 個無模板對照 NTC+1 個陰性質(zhì)控 NEG+待測樣本×2×注:待樣本×2 是為了讓每個待測樣本檢測時都同時做樣本 ERC 。                  2,根據(jù)反應(yīng)孔數(shù)計算本次實驗所需的各組分的所需總量以制備 pre-mix

2×Taqman master mix=(反應(yīng)孔數(shù)+2) ×15ul    (含有 孔的損失量)

10×CHO qPCR mix=  (反應(yīng)孔數(shù)+2×3ul

RNase-free H2O=  (反應(yīng)孔數(shù)+2×2ul

3,各試劑置于冰上融化,振蕩混勻,按表 所示進行加樣:

 3.各反應(yīng)孔加樣示例

 

標準曲

20ul pre-mix+ 10ul SD1/SD2/SD3/SD4/SD5/SD6

NTC

20ul pre-mix+ 10ul DNA dilution buffer

NEG

20ul pre-mix+ 10ul NEG

測樣本

20ul pre-mix+ 10ul  待測樣本

ERC 樣本

20ul pre-mix+ 10ul ERC 樣本

 

加樣完成后每孔總體積為 30ul。

表 4. 96 孔板排版示例

 


1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

SD6

SD6

SD6


S1

S1

S1


S1

ERC

S1

ERC

S1

ERC


B

SD5

SD5

SD5


S2

S2

S2


S2

ERC

S2

ERC

S2

ERC


C

SD4

SD4

SD4


S3

S3

S3


S3

ERC

S3

ERC

S3

ERC


D

SD3

SD3

SD3










E

SD2

SD2

SD2










F

SD1

SD1

SD1










G

NTC

NTC

NTC










H

NEG

NEG

NEG










注:該表示例的是檢測 個濃度梯度的 CHO  control  DNA 標準曲線(SD1-SD6) 個無 板對照 NTC、個陰性質(zhì)控 NEG個待測樣本(S1-S3)和每個樣本的 ERC(S1 ERC-SERC)。 每個檢測做 個重復孔。

 

4.   96 孔板用光學膜封閉,輕微振蕩混勻,短時間快速離心后放入 qPCR 儀中。

 

通用型PCR試劑盒qPCR 程序參數(shù)設(shè)置(以 ABI 7500 為例):

 

1.創(chuàng)建空白新程序,選擇絕對定量檢測模塊。

2.創(chuàng)建新檢測探針,命名為 CHO-DNA,選擇報告熒光基團為 FAM,淬滅基團為 none,檢測 參比熒光為 ROX。

3.設(shè)置兩步法反應(yīng)程序: 95oC 預變性 10min95oC 10 sec,60oC 1min,40 個循環(huán); 應(yīng)體積為 30ul

qPCR 結(jié)果分析(以 ABI 7500 為例)

1.在 Results 的 Amplification  plot 面板中, 將 Threshold 設(shè)置為 0.05 ,點擊 Analyze,此時可 步查看擴增曲線的形態(tài)是否正常。

2.在 Results  的 Plate 面板中,將標準曲線孔的 Task 一欄設(shè)置為 Standard,并且在 Quantity 一欄分別賦值為 3000 、300 30 、、0.3 、0.03  (含義為每孔的 DNA 量, 單位為 pg), 并且

在相應(yīng)的 Sample Name 一欄命名為 SD1 、SD2 SD3 、SD4 SD、SD6

3.在 Results 的 Plate 面板中,將無模板對照 NTC 孔的 Task 一欄設(shè)置為 NTC,將陰性質(zhì)控 NEG 孔、待測樣本孔、樣本 ERC 孔的 Task 一欄設(shè)置為 Unknown,并且在相應(yīng)的 Sample Name 一欄中命名為 NTC 、NEG 、ERC ,之后點擊開始鍵。

4.在 Results 的 Standard Curve  面板中,可讀取標準曲線的斜率(Slope)、截距(Intercept)、R2 。

5.在 Results 的 Report 面板中, Mean Quantity 一欄可讀取無末班對照 NTC陰性質(zhì)控 NEG、 待測樣本、樣本 ERC 的檢測值。后續(xù)可在檢測報告中將單位換算為 pg/ml  樣本

:根據(jù)待測樣本和樣本 ERC 的檢測結(jié)果計算加樣回收率,加樣回收率要求在 50%- 150% 




關(guān)鍵字: 通用型PCR試劑盒;

公司簡介

上海一研生物科技有限公司Shanghai yiyan bio-technology Co. Ltd.主要從事免疫學、分子生物學和常規(guī)生化試劑等為一體的科研產(chǎn)品銷售企業(yè),公司自成立以來,秉承""全心全意服務(wù)于科研工作者""的企業(yè)理念,立足生物科技領(lǐng)域,運用生物技術(shù)和科研試劑,發(fā)展現(xiàn)代生物科技,為各類大中小醫(yī)院及其它醫(yī)療機構(gòu)、高等院校、科研院所、企事業(yè)單位提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品,服務(wù)生物科技領(lǐng)域的科學研究人員。 公司具有對普通貨物、冷藏及冷凍倉庫的存儲、包裝及運輸能力。 公司將始終堅持信譽立業(yè)、以人為本、質(zhì)量保證、誠信服務(wù)的宗旨,不斷拼搏,開拓進取,與各界朋友攜手共創(chuàng)美好未來。
成立日期 2014-06-05 (11年) 注冊資本 100
員工人數(shù) 50-100人 年營業(yè)額 ¥ 100萬以內(nèi)
主營行業(yè) 生化試劑,抗體,細胞培養(yǎng),分子生物學,免疫安全 經(jīng)營模式 工廠,試劑
  • 上海一研生物科技有限公司
VIP 3年
  • 公司成立:11年
  • 注冊資本:100
  • 企業(yè)類型:營業(yè)執(zhí)照
  • 主營產(chǎn)品:、ELISA試劑盒、PCR檢測試劑盒、生化檢測試劑盒、標準品、抗體、細胞等
  • 公司地址:上海市閔行區(qū)莘福路2號樓
詢盤

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